- •А. И. Грицук, в. Т. Свергун, а. Н. Коваль
- •Гомель 2013
- •Введение в биохимию
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Энзимология и биологическое окисление
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
- •Теоретическая часть
- •Практическая часть
-
Теоретическая часть
-
Введение в биохимию. Краткая история биохимии. История отечественной биохимии. Общая характеристика обмена веществ. Понятие об анаболизме, катаболизме и метаболизме.
-
Белки – важнейшие компоненты организма. Функции белков, строение, классификация и свойства аминокислот. Обзор уровней структурной организации белковой молекулы. Молекулярная масса белков. Форма и размеры белковой молекулы.
-
Принципы определения структуры белка:
-
Кислотный гидролиз белка;
-
Разделение аминокислот с помощью ионообменной хроматографии;
-
Количественный анализ полученных фракций;
-
-
Определение аминокислотной последовательности в белках и олигопептидах;
-
Ферментативное расщепление пептидов (пепсином, трипсином, химотрипсином, папаином);
-
Химическое расщепление пептидов (бромцианом);
-
Определение С-концевых аминокислот (карбоксипептидазами);
-
Определение N-концевых аминокислот (дансил-хлоридом, динитрофторбензолом, фенилизотиоцианатом);
-
определение первичной структуры белка (аминокислотной последовательности);
-
методы пептидных карт («метод отпечатков пальцев»).
-
-
Изучение пространственной структуры белковой молекулы (вторичная, третичная, четвертичная структуры):
-
Рентгеноструктурный анализ.
-
Изучение трехмерных моделей белка (Protein Data Bank).
-
-
Представление о нативно-развернутых белках – функционально-активной форме белков в клетке.
-
-
-
Практическая часть
-
Решение задач.
-
Лабораторные работы.
-
Проведение контроля конечного уровня знаний.
-
Задачи
-
Рассмотрите указанные группы аминокислот и отметьте, какие из них являются гидрофобными:
а) тир, асп, глу; б) ала, лиз, сер; в) иле, лей, лиз; г) вал, лей, ала; д) арг, гли, цис?
-
Многие белки, содержащие 2 и более доменов, обнаруживают гомологию аминокислот. Эти белки образуются путем:
а) посттрансляционной модификации (процессинга); б) генетических изменений; в) дупликации генов и их слияния; г) аллостерической кооперации; д) транспептидных образований.
-
Остатки каких аминокислот в белках-гликопротеидах ковалентно связывают углеводы? Напишите пентапептид с этими аминокислотами (-ала-X-трп-Y-гли), где X и Y – названные аминокислоты.
-
Остатки каких аминокислот в белках-гистонах обладают положительным зарядом? Напишите пентапептид с этими аминокислотами (-ала-X-мет-Y-гли), где X и Y ‑ названные аминокислоты.
-
К фибриллярным белкам относятся:
а) альбумины; б) гистоны; в) коллагены; г) глобулины.
Лабораторные работы
Лабораторная работа. Количественное определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом (УИРС)
ВНИМАНИЕ! Соблюдать меры безопасности при работе с раствором гидроксида натрия.
Принцип метода. В щелочной среде пептидные связи белка образуют с ионами двухвалентной меди комплекс фиолетового цвета (см. уравнение). Интенсивность окраски раствора прямо пропорциональна концентрации белка, определяемой фотометрически.
Ход работы. В пробирку наливают 0,05 мл сыворотки крови, затем добавляют 2,5 мл биуретового реактива. Содержимое пробирки осторожно перемешивают, избегая пенообразования, и через 30 мин фотометрируют в кюветах 5 мм при 540 нм (зеленый светофильтр) против контрольного раствора (дистиллированная вода). Измерив экстинкцию исследуемого раствора, по калибровочной кривой определяют концентрацию белка.
Клинико-диагностическое значение. Нормальное содержание белка в сыворотке крови у взрослых людей – 65–85 г/л, у детей – 58–85 г/л.
Повышенное содержание белка в сыворотке крови (гиперпротеинемия) встречается сравнительно редко. Прежде всего, при сгущении крови из-за значительных потерь внеклеточной жидкости, например, при усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, профузных поносах (диареи), несахарном диабете, холере, обширных ожогах. Кратковременная относительная гиперпротеинемия отмечается также при ревматизме и миеломной болезни.
Снижение уровня белка в крови (гипопротеинемия) наблюдается при длительном голодании, нефритах, злокачественных опухолях, тяжелых гнойных процессах, обширных ожогах и др.
Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку.
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Рекомендуемая литература
Основная
-
Кухта, В.К и др. Биологическая химия: учебник / В.К. Кухта, Т.С. Морозкина, Э.И. Олецкий, А.Д. Таганович; под ред. А.Д. Тагановича. – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 3-4, 7-40.
-
Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. Е.С. Северина. – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 9-69.
-
Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 5-14, 23-78.
-
Николаев, А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 24-60.
-
Марри, Р. и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. 16-19, 42-51.
-
Березов, Т. Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. – М.: Медицина, 1998. – С. 19-77.
Дополнительная
-
Ленинджер, А. Л. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. Т. 1. С. 107–225.
-
Тюкавкина Н. А., Бауков Ю. И. Биоорганическая химия. М.: Медицина, 1991. С. 313–376.
-
Албертс Б. и др. Молекулярная биология клетки, М.: Мир, 1994. Т. 1. С. 113–171.