- •Ионнообменная хроматография
- •2. Этапы истории биохимии, основные направления биохимии,
- •5.Биологические функции и классификация белков.
- •6. Значение и специфичность действия ферментов.
- •7. Строение фермента.
- •8. Активный центр.
- •9. Определение активности ферментов.
- •10. Локализация ферментов в клетке, маркёрные и органоспецифические ферменты.
- •11. Механизм действия ферментов.
- •12 . Кинетика ферментативных реакций.
- •13. Регуляция активности ферментов.
- •14. Ингибирование ферментов.
- •15 . Номенклатураи классификация. Изоферменты. Изменение активности в энтогенезе.
- •15 . Энзимопатия.
- •16. Обмен веществ. Ката- и анаболизм .
- •17.Биологическое окисление.
- •18. Природа макроэргичности атф.
- •19. Цикл кребса.
- •20 . Тканевое дыхание.
- •21 . Дыхательная цепь.
- •22. Механизм сопряжения окислительного фосфорилирования.
- •23 . Термогенез.
- •24 . Микросомальная дыхательная цепь.
- •25 . Перекисное окисление и антиоксидантная защита.
- •26 . Углеводы и их переваривание.
5.Биологические функции и классификация белков.
Функции белков:
1.Каталтическая (обеспечивает поток вещества, энергии, информации: около 2500 ферментов являются
белками).
2. Транспортная (гемоглобин переносит кислород и углекислый газ, альбумины, трансферин, церулоплазмин).
3. Трофическая (резервная: альбумины, белки мышц, козеин, избыток белка превращается в липиды и углеводы).
4. Сократительная (локомоторная: актин, миозин).
5. Пластическая (структурная: коллаген, кератин, эластин).
6. Регуляторная (гормоны, альбумины регулируют осмотическое давление, водно-солевой баланс).
7. Защитная (интерфферон, протромбин, фибриноген).
8. Рецепторная (белки являются рецепторами, с помощью которых происходит восприятие сигнала из внешней среды).
9. Энергетическая.
Кроме всего этого белок - это главный злемент регуляции наследственного материала, генератор энергетического топлива в организме.
Классификация.
Выделяют две группы белков:
простые (протеины); построены только из аминокислот и при гидролизе распадаются только на аминокислоты: альбумины, гистоны, глобулины, проламины, протеиноиды;
сложные (протеиды); состоят из простого белка и небелкового комплекса (протетической группы): фосфопротеиды, хромопротеиды, нуклеопротеиды, гликопротеиды, липопротеиды.
МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ В РАСТВОРАХ.
Биуретовый метод:
В пробирку вносят 0,05 мл сыворотки крови, а затем - 2,5 мл биуретового раствора. Осторожно перемешивают. Через 30 минут в кювете при зелёном светофильтре (540 нм). Концентрацию исследуемого раствора сравнивают с графиком концентрации белка. Нормальное содержание белка в сыворотке у взрослых 6,5% - 8,5%, у детей - 5,6%- 8,55%. Повышенное содержание белка (гиперпротеинемия) встречается редко (при ревматизме, плазмоцитозе). Пониженное содержание белка (гипопротеинемия) – при злокачественных опухолях, дистрофии.
Рефрактометрический метод:
В основе лежит не одинаковая способность различных сред преломлять проходящие через них лучи света. Отношение sin угла падения к sin угла преломления называется коэффициентом преломления. Попадатель преломления вычисляется при помощи рефрактометра и соответственно этому значению находится процент содержания белка в сыворотке по таблице.
6. Значение и специфичность действия ферментов.
Ферменты, или энзимы, представляют собой высокоспециализированный класс веществ белковой природы, используемых живыми организмами для осуществления многих тысяч взаимосвязанных химических реакций, включая синтез, распад и взаимопревращение веществ. В настоящее время получены неопровержимые докозательства белковой природы ферментов:
Все ферменты действуют в мягких условиях: постоянная температура, постоянная рН, постоянная ионная сила, оптимальное соотношение субстратов, продуктов, модуляторов.
Все ферменты являются ВМС и образуют растворы, которые обладают буферными свойствами.
Способны к денатурации (необратимой) под воздействием тех же факторов, которые вызывают денатурацию белка. При этом ферменты полностью инактивируются.
При гидролизе распадаются на аминокислоты.
Обладают эффектом защиты (связывают ионы тяжёлых металлов).
Ферменты, как и белки, обладают антигенной активностью и при парентеральном введении стимулируют образование антител.
Имеют заряд, обладают электрофоретической подвижностью и амфотерными свойствами.
Не способны к диализу через клеточные мембраны.
Легко осаждаются из водных растворов методом фильтрования.
СПЕЦИФИЧНОСТЬДЕЙСТВИЯ ФЕРМЕНТОВ.
Высокая специфичность фермента обусловлена электростатической комплементарностью и уникальной структурой фермента, которое обеспечивает узнавание веществ. Имеются доказательства существования стереохимической специфичности, обусловленной существованием оптически изомерных L - и D – форм или геометрических (цис – и транс -) изомеров.
Так известны оксидазы L - и D – форм. Если какое-либо соединение существует в форме цис- и транс - изомеров, то для каждой из этих форм существует свой фермент. Например, фумараза катализирует превращение только фумаровой кислоты ( транс-) , но не действует на цис- изомер – малеиновую кислоту .