- •Принципы систематики:
- •11. Классификация патогенных прокариот по Берджи.
- •12. Принципы устройства иммерсионного, люминесцентного, электронного микроскопов. Типы микроскопических препаратов.
- •13. Основные формы микроорганизмов. Этапы приготовления микроскопических препаратов. Способы фиксации.
- •14. Методы микробиологических исследований. Бактериоскопический метод диагностики инфекционных заболеваний.
- •16. Характеристика клеточной стенки микробов.
- •17. Защитные приспособления микроорганизмов. Способы выявления капсул. Капсульные бактерии. Способы выявления спор. Спорообразующие бактерии. Окраска по Бурри-Гинсу:
- •Микро- и макрокапсула бактерий
- •Спора и спорообразование у бактерий
- •18. Жгутики бактерий. Определение подвижности.
- •19. Волютиновые зёрна. Химический состав. Функции. Способы окраски.
- •20. Простые и сложные методы окраски. Механизм окраски по Граму.
- •Окраска по Граму (механизм)
- •21. Морфология и ультраструктура спирохет. Методы микроскопии.
- •22. Актиномицеты. Систематическое положение. Роль в природе. Идентификация.
- •23. Морфология, классификация и способы обнаружения грибов.
- •24. Риккетсии. Таксономия патогенных риккетсий. Особенности размножения. Способы выявления.
- •25. Хламидии. Таксономия патогенных риккетсий. Особенности морфологии и развития. Способы выявления.
- •26, 27. L-трансформанты. Характеристика. L-формы бактерий. Морфология, биологические свойства.
- •28. Микоплазмы. Таксономия. Особенности строения и размножения. Методы обнаружения.
- •29. Метаболизм бактерий. Транспорт питательных веществ. Типы питания.
- •30. Основные принципы конструирования питательных сред. Классификация.
- •31. Бактериологический метод диагностики.
- •32. Ферменты бактерий. Классификация. Практическое использование биохимической активности микроорганизмов для видовой идентификации.
- •33. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий в закрытых системах.
- •34, 35 Классификация микроорганизмов по типу дыхания. Культивирование анаэробных бактерий. Этапы выделения культур анаэробных бактерий.
- •Культивирование и выделение чистых культур анаэробных бактерий.
- •Физические методы.
- •Биологические методы.
- •Особенности выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов.
32. Ферменты бактерий. Классификация. Практическое использование биохимической активности микроорганизмов для видовой идентификации.
Классификация ферментов
1) Экзо- 1) Обмена 1) Конститутивные
2) Эндо- 2) Агрессии 2) Индуцибельные
(индуктивные)
По катализируемым реакциям:
Гидролазы
Оксидоредуктазы
Изомеразы
Трансферазы
Лиазы
Лигазы (синтетазы)
По разлагаемым субстратам:
1) протеолитические (протеазы)
2) сахаролитические (карбогидразы)
3) липолитические (липазы)
Ферменты агрессии
инвазивности
гиалуронидаза
фибринолизин
нейраминидаза
коллагеназа и др.
агрессивности
лецитиназа (лицитовителлаза)
коагулаза
уреаза
ДНК-аза и др.
1. Карбогидразы - ферменты, разлагающие углеводы. Определяя карбогидразы, выявляют т.н. сахаролитические свойства микробов.
С этой целью используют следующие среды: а) среды Гисса (жидкие и полужидкие с индикаторами). О ферментативной активности бактерий судят по изменению цвета среды и образованию газа; б) дифференциально-диагностические среды с лактозой (Эндо, Левина. Плоскирева и др.); в) полиуглеводные среды (типа Олькеницкого, Клиглера и др.).
2. Протеазы - ферменты, разлагающие белки: а) Для выявления указанных ферментов исследуемую культуру засевают на ряд сред: свернутая сыворотка, столбик желатина (разжижение в положительных случаях), молочный агар в чашке Петри (в положительных случаях вокруг колоний появляются зоны помутнения); б) расщепление аминокислоты триптофана за счет действия фермента триптафаназы сопровождается образованием индола. Последний выявляется с помощью бумажки, смоченной щавелевой кислотой и укрепленной под пробкой над питательной средой. В положительныхслучаях бумажка краснеет; в) для выявления ферментов расщепления серосодержащих аминокислот (цистин, цистеин) ставят пробы на H2S (бумажка, пропитанная ацетатом свинца, чернеет).
г) для выявление аммиака используют лакмусовую бумагу (посинение). д) для выявления уреазы - фермента, расщепляющего мочевину, в питательную среду нейтральной рН добавляют мочевину и индикатор. В положительных случаях среда изменяет цвет за счет сдвига рН в щелочную сторону в связи с образованием аммиака.
3. Липазы - ферменты разложения липидов и липоидов. Чаще всего определяют лецитиназу посевом на желточный агар. Лецитиназа расщепляет лецитин, при росте колоний вокруг них появляются опалесцирующие зоны, отражающие лецитиназную активность. 4. Гемолизины - ферменты расщепления фосфолипидной мембраны эритроцитов. Они выявляются посевом культуры на кровяной агар (5-10%). Различают бэта-гемолиз или полный гемолиз, когда образуются зоны просветления вокруг колоний, альфа-гемолиз, неполный гемолиз, при наличии зон зеленого цвета вокруг колоний. Отсутствие гемолиза обозначается как гамма-гемолиз. 5. Оксидо-редуктазы: 1. Определение оксидаз. На фильтровальную бумагу, смоченную 1% раствором тетраметилпарафенилендиамина, петлей наносят полосы испытуемой культуры. В положительном случае появляется фиолетовое окрашивание полос (в течение 1 мин). 2. Определение каталазы. Каплю 3% раствора перекиси водорода наносят на предметное стекло и туда вносят петлю испытуемой культуры. В присутствии каталазы образуются пузырьки кислорода. 3. Определение дегидраз. О наличии дегидраз судят по редуцирующей способности микроба, т.е. способности восстанавливать некоторые органические красители (например, 1% водный раствор метиленовой синьки).