![](/user_photo/2706_HbeT2.jpg)
- •Фотоэлектроколориметр
- •4. Провести очистку белка от низкомолекулярных примесей методом диализа и гельфильтрации на молселекте.
- •5. Определить концентрацию белка сыворотки крови биуретовым методом.
- •6. Разделить белки сыворотки крови мегодом высаливания.
- •7. Установить наличие белка ь моче при протеинурии.
- •8. Определить концентрацию белка в моче по методу Робертса-Стольникова-Брандбсрга.
- •9. Поставить опыт с целью установить специфичность и термолабильносгъ слюны, влияния активаторов и ингибиторов на активность амилазы слюны.
- •10. Определить содержание витамина с в моче, шиповнике, картофеле, проводить качественные реакции на витамины а, д, е, b1, b2, рр
- •2.1. Анилиновая проба на витамин д.
- •2.2. Реакция с серной кислотой.
- •5.1. Реакция с гидросульфитом натрия.
- •5.2. Реакция с раствором уксусно-кислой меди.
- •11. Определить все виды кислотности желудочного сока и ряд патологических компонентов (молочную кислоту, кровь, желчные кислоты и пигменты).
- •12. Провести анализ мочи, уметь определять в моче патологические компоненты: глюкозу, ацетоновые тела, кровяные пигменты, желчные пигменты и кислоты.
- •1. Качественное определение белка.
- •2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.
- •3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».
- •4. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.
- •5. Качественное определение кетоновых тел.
- •6. Качественная реакция на кровяные пигменты.
- •7. Качественное определение желчных пигментов.
- •8. Проба Петенкофера на желчные кислоты.
- •9. Проба Яффе на уробилин.
- •10. Качественное определение индикана в моче.
- •2. Определение активности амилазы в слюне и моче по Вольгемуту.
- •3. Определение содержания пировиноградной кислоты в крови.
- •5. Количественное определение холестерина в сыворотке крови.
- •8.0Пределснис активности аспартатаминогрансферазы. Колориметрический метод определения активности аспартат- и аланинаминотрансфераз в сыворотке крови.
- •9. Количественное определение остаточного азота крови.
- •11. Количественное определение креатинина в сыворотке крови и моче.
- •12. Количественное определение мочевой кислоты в крови.
- •13. Общий анализ мочи: физико-химические свойства, химический состав мочи, определение патологических компонентов мочи.
- •1. Качественное определение белка.
- •2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.
- •3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».
- •4. Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.
- •5. Качественное определение кетоновых тел.
- •6. Качественная реакция на кровяные пигменты.
- •7. Качественное определение желчных пигментов.
- •8. Проба Петенкофера на желчные кислоты.
- •9. Проба Яффе на уробилин.
- •10. Качественное определение индикана в моче.
- •14. Определение содержания кальция в сыворотке крови.
- •16. Количественное определение содержания гемоглобина крови.
- •17. Количественное определение билирубина в сыворотке крови по методу Иендрашека.
3. Определение содержания пировиноградной кислоты в крови.
Количественное определение пировиноградной кислоты в моче.
Принцип метода. Пировиноградная кислота является одним из промежуточных продуктов углеводного обмена. Пировиноградная кислота взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде, образуя 2,4-динитрофенилгидразоны пировиноградной кислоты желто-оранжевого цвета, интенсивность окрашивания которых пропорциональна концентрации пировиноградной кислоты.
Гидразоны α-кетоглутаровой, щавелевоуксусной, дегидроаскорбиновой кислот в щелочной среде нестойки и быстро разлагаются.
Ход работы. Контрольная и опытная пробы ставятся одновременно, пользуются сухой химической посудой. Берут 2 пробирки: в контрольную наливают 1мл воды в опытную 1 мл мочи. Зачем в обе пробирки приливают по 1 мл 2,5% спиртового раствора КОН, перемешивают в течение 1 минуты, а затем приливают по 0,5мл 0,1 % раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять на 15 минут при комнатной температуре. Колориметрируют на ФЭК против контроля на реактивы (проба с водой) в кювете толщиной 5мм с синим светофильтром. Расчеты выполняют по калибровочному графику, при этом находим содержание ПВК в моче в мкг/мл. Найденную величину умножаем на суточный диурез (1500 мл для мужчин и 1200 мл для женщин) и получаем содержание ПВК в суточной моче. В норме экскреция ПВК с мочой составляет 10-25 мг в сутки (113,7-283,9 мкмоль/сут).
Увеличение выделения ПВК с мочой наблюдается при авитаминозе и гиповитаминозе В1. Содержание ПВК в крови и экскреция с мочой возрастает также при сахарном диабете, сердечной недостаточности, гиперфункции гипофизарно-адреналовой системы. При наркозе содержание ПВК в крови, напротив, снижается 4. Количественное определение глюкозы крови. Сахарная кривая.
Для количественного определения глюкозы в крови используются следующие методы:
I. Редуктометрические – они основаны на свойстве сахаров восстанавливать в щелочной среде соли тяжёлых металлов (титрометрический метод Хагедорна-Йенсена). Недостаток этих методов состоит в том, что они неспецифичны, так как присутствующие в крови рецидивирующие вещества, не являющиеся углеводами, также обладают восстанавливающими свойствами (мочевая кислота, глютатион, креатинин), и полученные результаты включают всю сумму восстанавливающих соединений в крови.
II. Колориметрические – базируются на методологии определения в конечной точке. В зависимости от химической природы аналитической реакции эти методы подразделяются на неферментные и ферментные (энзиматические):
1. Неферментные - основаны на определении степени интенсивности окраски соединений, образующихся при взаимодействии глюкозы с определенным веществом (ортотолуидиновый метод; специфичен и точен).
2. Энзиматические методы основаны на каталитическом действии ферментов (глюкозооксидазы и гексокиназы). Применение энзимных реагентов значительно увеличивает специфичность метода. Процедуры, связанные с использованием глюкозооксидазной и гексокиназной реакций, могут быть автоматизированы, что значительно повышает чувствительность и точность способа определения глюкозы.
Клинико-диагностическое значение определения содержания глюкозы в крови. В норме содержание глюкозы в крови у взрослых составляет 3,9 -5,8 ммоль/л или 0,7-1,0 г/л. Увеличение концентрации глюкозы в крови- гипергликемия - наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара (алиментарная гипергликемия), при клинически выраженной форме сахарного диабета, остром панкреатите, травмах и опухолях мозга, повышении гормональной деятельности щитовидной железы, коры и мозгового слоя надпочечников, гипофиза, сильном эмоциональном и психическом возбуждении. Уменьшение уровня глюкозы в крови - гипогликемия наблюдается при передозировке или неоправданном назначении инсулина, некоторых формах гликогенозов, нарушении всасывания углеводов, заболеваниях поджелудочной железы, сопровождающихся гиперсекрецией инсулина (инсулиноме и др.), при недостаточной выработке контринсулярных гормонов, длительном голодании и др.
Определение глюкозы в крови по цветной реакции с орто-толуидином.
Принцип метода. Белки крови осаждаются трихлоруксусной кислотой и отделяются центрифугированием. Центрифугат обрабатывается орто-толуидиновым реактивом.
Глюкоза при нагревании с о-толуидином в кислой среде дает зеленое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови и определяется колориметрически на ФЭКе.
Ход определения. В центрифужную пробирку налить 0,9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты и выдуть на стенку пробирки 0,1 мл крови, взятой из пальца. Содержимое пробирки взболтать и центрифугировать 5-7 мин при 1500 об/мин.
Взять две пробирки. В первую (опыт) прилить 0,5 мл центрифугата, во вторую (контроль) - 0,5 мл 3% раствора трихлорукусусной кислоты и в обе пробирки добавить по 4,5 мл 0-толуидинового реактива. Пробирки поместить на 8 мин (точно!) в кипящую водяную баню и сразу охладить под водопроводной водой до комнатной температуры.
Опытную пробу колориметрировать против контроля или дистиллированной воды на ФЭКе в кювете толщиной слоя 10 мм при красном (600-650 нм) или желтом (595 нм) светофильтре.
Расчет произвести по калибровочному графику или с применением стандартного раствора глюкозы.
Стандартная проба. Стандартную пробу проводят как опытную, но вместо крови используют стандартный раствор глюкозы с концентрацией 5,55 ммоль/л (1,0 г/л), а в случае высокого содержания сахара в крови 16,65 ммоль/л (3,0 г/л) или 27,75 ммоль/л (5,0 г/л).
Расчет произвести по формуле:
Соп = (Сст × Еоп) / Ест = ммоль/л глюкозы или г/л глюкозы, где
Соп - концентрация глюкозы в опытной пробе в ммоль/л или г/л,
Сст - концентрация глюкозы в стандартной пробе в ммоль/л или г/л,
Еоп - оптическая плотность опытной пробы,
Ест - оптическая плотность стандартного раствора глюкозы
Сахарная кривая - Суть метода заключается в измерении у пациента уровня глюкозы крови натощак, затем в течение 5 минут предлагается выпить стакан теплой воды, в котором растворена глюкоза (75 грамм, у детей 1,75г. на кг. массы тела). через 2 часа вновь измеряют уровень сахара в крови.