23 Фотобиологические процессы

36 Сатурационный анализ

Сатурационный анализ – вид исследов, основанный на конкурирующем связывании некоторых в-в (лиганд) с анализ в-вом биологического происхождения и его меченным аналогом, добавленным извне.

Анализ. в-во и аналог конкурируют за лиганд, кот. используют в таком количестве, чтобы быть конкурентоспособным.

Чем больше в пробе определенного вещества, тем меньше связей с лигандом меченого вещества. После некоторого времени комплекс отделяется от свободных ингредиентов, подсчитывается количество меченого вещества в составе комплекса/вне его.

Лиганды:

1 – антитела

2 – специфические транспортные белки

3 – рецепторные белки органов-мишеней

Лиганд используют исключительно биологического происхождения, меченое соединение получается из природной, прибавленной к нему, метки, чаще всего – радиоактивны.

Разновидности:

природное вещество соединяется с радиоактивной меткой, при этом используется радионуклидный анализ, различающиеся в зависимости от природы акцептора:

- истинно радиоиммунологический метод

- метод белково-конкурентного анализа (н, крови)

- тканевые белки – радиорецепторный анализ

37 Радионуклидный сатурационный анализ

Сатурационный анализ – вид исследования, основанный на конкурентном связывании некоторых веществ (лиганды) с анализирующим веществом биологического происхождения и его меченым аналогом, добавленным извне.

Чем больше в пробе определяемого вещества, тем больше связывается с лигандом меченое вещество. После некоторого времени комплекс отделяют от свободных ингредиентов и подсчитывают количество меченого вещества в составе комплекса вне его.

В качестве лигандов используют антитела, специфические транспортные белки, рецепторные белки органов-мишеней.

Лиганды имеют исключительно биологическое происхождение, меченые соединения получают из природного вещества, добавляя к нему метку, чаще всего радиоактивную.

Разновидности: природное вещество, соединяют с радиоактивной меткой, при этом используют радионуклидный анализ, различающийся в зависимости от природы акцептора: истинно-радиоиммунологический-(1), метод белково-конкурентного анализа (крови, например)-(2), радиорецепторный анализ(3).

1)Основан на иммунохимической реакции антиген со специфическим антигеном. Определяемое вещество является антигеном, радиоактивным индикатором служит меченый антиген. При оптимальном подборе концентрация основных реагентов и условий проведения реакции происходит реакция меченых и немеченых антигенов с определенным количеством специфичного антитела. При достижении равновесия свободный антиген легко отделяется от антигена, связанного с антителом. Степень конкурирующего ингибиторамеченного антигена в исследуемых образцах связывается с таковой в калибровочных растворах и по калибровочной кривой определяется соединение исследуемого вещества в анализируемой пробе. Твердофазные металлы – антитела фиксируются на иммунносорбентах.

2) Принцип иммуннорадиометрического анализа как в 1), но в качестве меченного реагента используются антитела. Агенты (как и другие элементы) – нерадиоактивные компоненты реакции.

3) Радиоконкурентный анализ базируется на конкурентном взаимодействии между исследуемым веществом, его меченым аналогом и связанной компонентой (специфические белки плазмы). По сравнению с 1) обладает меньшей чувствительностью и более низкой специфичностью.

4) Радиорецепторный анализ – в качестве связывающей компоненты принимается тканевый рецептор, индикатором является меченый лиганд. Достоинства анализа: получаемый результат очень тесно отражает биологическую активность исследуемых веществ; широко используется для определения концентрации рецепторов, особенно в опухолевых тканях.

5) Радиоэнзиматический анализ связывает реагенты для определения вещества и меченного производного, использует другие вещества, которые могут прочно связываться с молекулярного лиганда, не вызывая заметных изменений его свойств и который точно может измеряться в малых количествах.

В качестве меток также используются:

1) Флуоресцентная метка. Обладает меньшей чувствительностью. При измерении флуоресценции есть высокий уровень фона, обусловленный собственной флуоресценцией.

2) Ферментная метка. Основана на способности отдельных ферментов связываться с другими молекулами, создавая основу для получения меченых соединений. Благодаря высокой каталитической способности первой его молекулы вызывает превращение большого количества молекулярного субстрата, по степени его разрушения или образования могут определять активность фермента (например, используя методы колометрии).

3) Свободнорадикальная метка. Свободная радикальная метка – молекула, содержащая неспаренный электрон и обладающая магнитным моментом, который может измеряться с использованием методов электрического парамагнитного резонанса. Связываясь со специфическим антителом, свободный радикал мобилизируется, и это вызывает изменения спектра электрического парамагнитного резонанса. При измерении не нужно производить измерение связанных и свободных меченых лигандов. Недостаток – сложность аппаратуры.