Учебная цель

Общая цель – Знать общие принципы микроскопических методов исследования. Уметь работать на световом микроскопе.

Конкретная цель – 1.Знать принципы работы и овладеть навыками работы на световом микроскопе. 2.Знать принципы работы поляризационной микроскопии. 3.Знать принципы работы фазовоконтрастной микроскопии. 4.Знать принципы работы интерференционной микроскопии. 5.Знать принципы работы флуоресцентной микроскопии. 6.Знать принципы работы электронной микроскопии. 7.Иметь представление о гистологических и гистохимических методах исследования. 8.Иметь представление о количественном методе исследования.

Необходимый исходный уровень знаний

Из других предметов и предшествующих тем:

1.Физические свойства световой, люминесцентной, электронной микроскопии.

2. Химические свойства кислотных и щелочных растворов.

3. Устройство световых микроскопов: «Биолам», «Эрудит», «МБР-1», «МБИ»

Вопросы для самоподготовки.

1. Назвать основные части светового микроскопа.

2. Что такое разрешающая способность микроскопа.

3. Правила работы с микроскопом.

4. Что такое тёмнопольная микроскопия и её применение при исследовании объектов.

5.Каковы возможности фазовоконтрастной и интерференционной микроскопии в изучении биологических объектов.

6. Люминесцентная микроскопия. Первичная и вторичная флуоресценция.

7.Принципы работы электронного микроскопа. Его разрешающая способность.

8. Гистологические и гистохимические методы исследования.

9. Количественные методы гистологического исследования.

Рекомендации для работы на занятии. Задание 1. Овладеть правилами работы со световым микроскопом.

Объект изучения – «Биолам», «Эрудит», «МБР-1».

Программа действий – Научиться микроскопировать при малом и большом увеличении объ­ектива.

Ориентировочные основы действий – Прежде, чем начать работу с микроскопом, нужно уста­новить его на рабочем месте так, чтобы он был обращен колонкой к наблюдателю, а зеркалом к источнику света. Затем установить освещение при слабом увеличении объектива, повернув зеркало так, чтобы поле зрения микроскопа было освещено равномерно и достаточно ярко, но чтобы свет не раздражал глаз. После этого положить препарат на предметный столик по­кровным стеклом кверху, чтобы объектив приходился против отверстия столика. Микроскопирование препарата всегда надо начинать при слабом увеличении, глядя сбоку на микро­скоп, нужно опустить его тубус, вращая от себя макровинт до тех пор, пока фронтальная ли­ния объектива не будет на расстоянии 0,5 см от покровного стекла. Затем, смотрят в окуляр левым глазом и, держа при этом правый глаз открытым, медленно вращать макровинт на себя до получения изображения препарата. Для более четкой наводки пользуются микровинтом, вращая его не более, чем на пол-оборота в обоих направлениях. С помощью микровинта мож­но определить толщину препарата в мкм. Изучая препарат при слабом увеличении микроско­па, нельзя ограничиваться одним полем зрения – необходимо исследовать препарат по всей его поверхности, т.к. заключенный под покровное стекло гистологический срез может лежать не совсем горизонтально, и толщина его частей может быть разной, при его перемещении те­ряется четкость изображения. Поэтому нужно, передвигая препарат держать свободную руку на макровинте и слегка вращать его. Но при этом нужно помнить, что микроскоп дает обрат­ное изображение, т.е. при перемещении препарата сверху вниз изображение будет двигаться снизу вверх. После того, как найдено на препарате хорошее место дальнейшего изучения, не­обходимо поставить его в центре поля зрения и закрепить препарат зажимами. После этого сменить увеличение на сильное: поднять тубус микроскопа при помощи поворота микровин­та на себя, сменить объектив слабого на объектив сильного увеличения поворотом револьве­ра. Глядя сбоку на микроскоп, вращают микровинт от себя до тех пор, пока фронтальная лин­за не приблизиться вплотную к покровному стеклу. После этого, глядя в окуляр, осторожно вращать микровинт на себя до появления четкого изображения препарата. Наиболее четкая наводка на фокус достигается вращением микровинта так же, как и при слабом увеличении. После окончания микроскопирования нельзя сразу снимать препарат с предметного стекла, нужно предварительно поднять тубус несколькими оборотами макровинта, иначе можно по­вредить препаратом фронтальную линзу. Затем приводят микроскоп в исходное состояние, т.е. ставят над отверстием столика объектив слабого увеличения на расстоянии 2-3 см. от не­го. Перенося микроскоп, держат правой рукой колонку штатива, а левую подставляют под его основание. С помощью оптических микроскопов можно изучать биологические объекты при различном увеличении. Увеличение до 440 х дают «сухие» объекты, т.е. те, при работе с которыми между препаратом и объективом имеется небольшое пространство (воздух), боль­шое увеличение достигается с помощью короткофокусных объективов, когда между объективом и исследуемым препаратом помещают каплю жидкости (вода, масло). Эта система называется иммерсионной. В зависимости от применяемой жидкости различают масляную или водную иммерсию. Иммерсионная система позволяет изучать препараты с увеличением в 1200-1500 раз. Оптические микроскопы обладают ограниченными данными, в связи с чем, в гистологию введены новые методы микроскопии.