Лабораторные и инструментальные методы исследования
В соответствии с задачами исследования лабораторно - инструментальпое обследование больных включало: определение биохимических и клинических и
параметров крови, корнеометрия, лазерная конфокальная микроскопия и ультразвуковое исследование.
Оценка гематологических показателей
Исследование крови производилось со стандартным набором реактивов автоматическим методом на гематологическом анализаторе JENSKulter (США) в клинической лаборатории Первого МГМУ им. И.М.Сеченова. Были определены данные показатели: гемоглобин, тромбоциты, лейкоциты, эритроциты, эозинофилы, СОЭ. В ходе выполнения биохимического анализа крови также оценивались: глюкоза, холестерин, общий белок, общий билирубин, мочевая кислота, АЛТ и АСТ. Все показатели полученны с помощью автоанализатора
«Konelab 30i» (фирмы Thermoelectron, Швейцария) в биохимической лаборатории Первого МГМУ им. И.М.Сеченова.
Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия.
Неинвазивные методы оценки морфофункционального состояния кожи в последные годы стали одними из приоритетных направлений в дерматологии. Одним из последних свершений данной области считается лазерная сканирующая конфокальная микроскопия (КЛСМ). С помощью КЛСМ можно наблюдать динамику лечения дерматологических болезней, изменения в структуре кожи под влиянием инсоляции, при этом не нарушается целостность кожных покровов, в отличие от традиционной гисталогии. Главными преимуществами данного метода являются быстрота получения результатов обследования, безболезненность процедуры, отсутствие повреждения кожных покровов, возможность неоднократно обследовать одни и те же очаги, срезы ориентированы параллельно поверхности кожи.
Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия демонстрирует результаты исследований в четырех измерениях: шивина, высота, времия и глубина.
В нашем исследовании использовался конфокальный лазерный микроскоп Vivascope 1500 (Lucid Inc, США) (рис. 6).
Рисунок 6. Конфокальный лазерный микроскоп Vivascopе 1500 (Lucid Inc, США)
Основная особенность КЛСМ — применение точечного источника света, освещающего небольшой участок ткани, с дальнейшим улавливанием отраженного света через оптически соединенную апертуру. Отраженный свет протекает через апертуру, затем лишь имеющийся в фокусе свет доходит детектора, а свет вне фокуса отклоняется. Таким способом, определяется только единственный план внутри образца, который предрасположен в фокусе. Числовая апертура линзы объектива, длина волны и размер открытой апертуры устанавливают разрешение изображения, получаемого при помощи КЛСМ. Лазеры с разними длин волн используются как источника света для отражающей КЛСМ. Более длинные волны по длиннее, близкие к инфракрасным, проходят глубже в кожу, при этом предоставляют более низкое разрешение, сравнимое с
таковым коротких волн видимого спектра. В результате локального отличия в коэффициенте преломления внутри ткани возникает отражение света (для отдельных структур). Меланосомы дают мощное отражение с длинами волн видимого (400—700 нм) и близкого инфракрасного (700—1064 нм) спектров, из- за этого меланоциты и базальные кератиноциты, которые содержат меланин, изображаются ярко. В микроскопе утилизируется диодный лазер с длиной волны 308 нм и мощностью менее 28 мВт на поверхности кожи. Из кончика объектива данного микроскопа сходит лазерный луч, полный угол расхож¬дения лучей 128°.
Используется плотный специальный гель для УЗИ в качестве иммерсионной среды между адгезивным окошкой и линзой объектива (Sonogel, Vertriebs, Германия), а между тканью и окошком используется специальное масло косметическое (Contacting agent STS, Mavig, Германия) с оптимальным индексом рефракции. КЛСМ дает возможность витального просмотреть кожу на глубину до 250 мкм. Размер каждого изображения полученного на экране является 500x500 мкм. Сканирование выполняется при помощи 30-кратного иммерсионного объектива с фокусным расстоянием 5,3 мм.
При прмощи КЛСМ возможно обрести изображения придатков кожи и отличить клетки различных слоев эпидермиса, волокна сосочкового слоя дермы и оценить состояние капилляров в дерме.
Во время воспроизведения изображения используется специальное устройство для контакта с кожей, чтобы уменьшить образование артефактов (рис. 7). Оно содержит воду или гель на границе раздела фаз. Это устройство состоит из металлического кольца, которое фиксируется на коже пациента путем прилипания и соединяется с микроскопом, снабженным магнитом.
Рисунок 7. Устройство конфокального микроскопа для контакта с кожей.
Таким образом, КЛСМ позволяет оценивать патоморфологические изменения в коже при различных дерматозах. Учитывая неинвазивный характер данного метода, можно исследовать один и тот же участок многократно, что полезно при оценке динамических изменений, происходящих в коже в ходе эволюции заболеваний и на фоне проводимой терапии.