Лекция -15. Диагностическая стратегия и тактика в эпизоотологии. Диагностика инфекционных болезней. Идентификация возбудителей и их индикация в объектах ветнадзора.

Значение и место диагностики в системе ППМ. Диагностика - «глаза и уши» эпизоотологии. Исторические аспекты отечественной ветеринарной диагностики.

Основные направления в диагностике инфекций:

• клинико-эпизоотологический анализ;

• макро- и микроскопическое исследование инфицированных тканей с целью выявления специфических поражений;

• микробиологические приемы выделения и идентификации возбудителей;

• серологические тесты для определения специфических антител или выявление динамики их нарастания.

Диагностические ситуации в эпизоотологии:

Определение:	Общая стратегия:
благополучные	эпизоотологический мониторинг;
угрожаемые, предъэпизоотические	клиническое наблюдение, контроль факторов и групп риска, серологическая разведка, животные-сентинел в системе эпизоотологического мониторинга и надзора;
неблагополучные, эпизоотические	клиническая и эпизоотологическая диагностика, патоморфологические исследования, изоляция и идентификация возбудителя в системе эпизоотологического надзора и контроля;
постэпизоотические	характеристика постинфекционных изменений, анамнез клинический и эпизоотологический, патогномонические и постморбидные признаки, постинфекционный иммунитет (IgM, IgG) в системе эпизоотологического мониторинга и надзора.

Методологические принципы диагностики инфекционных болезней:

Манифестная инфекция - острая, подострая, хроническая, ремиссии	клинические и патогномонические признаки прямая демонстрация возбудителя или его антигенов изоляция возбудителя его идентификация (микробиологическая, серологическая, генетическая)
Скрытая инфекция - латентная, персистентная, медленная	демонстрация иммунного ответа - антигены и антитела (серологическая эпизоотология) биохимические (гематологические) изменения идентификация генома возбудителя (молекулярная эпизоотология)
Постинфекционные состояния	клиническая история (анамнез) патогномонические изменения демонстрация иммунного ответа (антитела)

Методология:

• патогенетические аксиомы - ворота инфекции, локализация инфекционного процесса и динамика его развития, локализация и специфика поражений, локализация возбудителя, симптомы и трансмиссия, циркулирующие системы, типичные поражения, выделения, паренхиматозные органы;

• анализ ситуации и формулировка диагностических задач - выделение и идентификация возбудителя, тестирование антител, патоморфологические тесты, виды и типы специментов;

• алгоритмы решения. Общая схема:

  Стадии:	Маркеры инфекции (выраженность):
  инкубационный период	возбудитель (++)
  генерализация инфекции	возбудитель (++++)
  манифестная форма	возбудитель (+++), антигены (+++)
  конвалесценция	антигены (++), IgM (++++)
  ремиссии	антитела IgG, IgA (++++)

• множественное тестирование: параллельное, серийное (последовательное), ретестирование (негативного стада).

Общие требования к средствам и методам диагностики и их качественные характеристики:

• чувствительность (пропорция истинно положительных, «правильных» результатов) и специфичность (пропорция истинно отрицательных результатов);

• аутентичность, или соответствие - правильность выбора как теста, так и объекта);

• чистота, или точность - глубина, или уровень постановки диагноза по линии: симптом  этиология  идентификация возбудителя  нозология  разновидность возбудителя. Например, мастит  инфекционный  бактериальный  стафилококковый, или трахеобронхит собак  инфекционный  аденовирус собак  2 типа;

• разрешающая способность, или обоснованность (достаточность) - необходимая полнота методического спектра диагностики по линии: клиника и симптоматика  биохимия, гематология, патоморфология  микробиология  серология  геномный или полипептидный анализ. Например, репродуктивные расстройства у свиноматок  гибель и рассасывание эмбрионов, мумификация плодов и мертворождаемость  выявление антигенов парвовируса свиней с помощью МФА в тканях пораженных плодов  определение сероконверсии в парных сыворотках свиноматок в отношении ПВС, сравнение титров IgM и IgG, или массовый острый лихорадочный синдром и угнетение у свиней всех возрастов  экстенсивный геморрагический диатез на вскрытии  выделение вируса КЧС в культуре клеток с помощью МФА  окончательное подтверждение биопробой на животных, или прогрессирующее исхудание взрослого КРС  персистентный лимфоцитоз  РИД-позитивность на лейкоз;

• прецизионость (статистическая достоверность);

• воспроизводимость (повторяемость в чувствительности и специфичности);

• достоверность (надежность, испытанность);

• ценность, стоимость;

• репрезентативность выборки.

Семиотика (см. лекцию 7), патогномонические макро- и микроскопические признаки (на вскрытии и при патогистологическом исследовании):

• клиническое проявление инфекционных болезней;

• возбудитель и антигены в мазках-отпечатках, тельца-включения;

• дифференциальные таблицы (по клинической картине, макро- и микроизменениям).

Микробиологическая диагностика:

• прямое обнаружение возбудителя - светооптическая и электронная микроскопия, иммуноэлектронная микроскопия, экспресс-методы, общие свойства - бактериальный рост, фильтруемость, патогенность для лабораторных моделей;

• метод флюоресцирующих антител, другие хромогенные субстраты и метки (ферритин, коллоидное золото);

• выделение возбудителя на биообъектах - биопроба, экспериментальная инфекция, моделирование, признаки (куриные эмбрионы, культура клеток, лабораторные и естественно-восприимчивые животные);

• количественные аспекты и разрешающая способность методов, количественные тесты, титрование, выражение;

• идентификация - культуральные, биохимические, генетические свойства и признаки, таксономия возбудителя.

Серологическая диагностика:

• серологические реакции, методы серодиагностики, номенклатура, чувствительность и специфичность;

• качественные тесты с одним разведением сыворотки (РДП, РИД, РСК);

• тесты с серийными разведениями сыворотки (РН, РСК);

• тесты с прецизионными возможностями - иммуноферментный анализ и РНГА (количество), иммуноблотинг (качество, антигенный спектр антител);

• количественные измерения, выражение, тесты, разведения, логарифмическая трансформация (log₂), средние геометрические титры (СГТ);

• серотипизация и тесты.

Организационно-правовые основы:

• нормативно-техническая документация;

• силы и средства, уровни решения проблем (ветлаборатории, НИУ, прецизионные центры), ответственность;

• материально-техническое обеспечение (приборы, реактивы, биопрепараты, их разработчики и производители), стандартизация и сертификация.

Интерпретация результатов:

• статистическая обработка, количественное выражение и достоверность результатов;

• истинно положительный и отрицательный результаты, принципиальные различия их получения и реализации;

• ложно-положительные результаты и их причины - перекрестные реакции, неспецифические ингибиторы, неспецифическая агглютинация;

• ложно-отрицательные результаты и их причины - естественная или индуцированная толерантность и супрессия (например, вирусная диарея+лейкоз КРС в РИД), неверно выбранные время тестирования или сами тесты, неспецифические ингибиторы (антикомплементарность сыворотки, токсичность для субстратов, неполные или блокирующие антитела, недостаточная чувствительность тестов).

Целевые возможности диагностических направлений и отдельных методов в решении общих и частных эпизоотологических задач (см. выше). Место и уровни.

Дифференциальная диагностика и ее эпизоотологическое значение при инфекциях различных категорий.

Прецизионный анализ в диагностике инфекций. Цели, задачи, методы и уровни решений.

Проблема дифференциации постинфекционного и поствакцинального иммунитета.

Определение и принципы серологической эпизоотологии:

• серопозитивность, серонегативность, сероконверсия;

• аналитическая специфичность и титры - предельные возможности, обеспечение чистоты, или точности диагноза, выявление минимальных «следов» инфекции, как правило скрытой;

• диагностическая специфичность и титры - оптимальные расчетные (эмпирически) значения, коррелирующие с показателями других тестов (как правило клиническо-морфологических), подтверждение достоверности и достаточности диагноза.

Индикация возбудителей инфекций как система:

• цели и задачи;

• микробиологические объекты ветнадзора;

• методологические принципы исследования внешней среды.

Лабораторные инфекции и способы их предупреждения.