5.3.6. Цианидный фотоколориметрический метод

Фотоколориметрический метод с использованием феррицианида калия основан на колориметрировании избытка щелочного раствора феррицианида калия после реакции с редуцирущими сахарами, применяется для всех кондитерских изделий и полуфабрикатов (ГОСТ 5903).

Аппаратура, материалы, реактивы. Весы лабораторные; колбы конические вместимостью 100, 1000 куб.см; пипетки мерные вместимостью 10, 25 куб.см; плитка электрическая нагревательная; фотоэлектроколориметр, обеспечивающий измерения в интервалах длин волн 315 - 630 нм с основной погрешностью не более 1% (по коэффициенту пропускания) или 0,1Д (по оптической плотности); часовые стекла диаметром 50 - 60 мм; эксикатор; вода дистиллированная; глюкоза (безводная); гексацианоферрат (III) калия (феррицианид), щелочной раствор; стандартный раствор глюкозы.

ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

1. Щелочной раствор гексацианоферрата (III) калия: взвешивают 8 г гексацианоферрата (III) калия и 28 г гидроксида калия (или 20 г гидроксида натрия). Отдельно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды. Затем оба раствора сливают в мерную колбу вместимостью 1000 куб.см и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор готов к использованию через сутки. Раствор можно хранить в склянке из темного стекла в течение 2 мес.

2. Стандартный раствор глюкозы: 1,6 г безводной глюкозы взвешивают с точностью до 0,0002 г и растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 куб.см. Предварительно глюкозу выдерживают в эксикаторе над свежепрокаленным хлоридом кальция в течение 3 сут. После растворения навески раствор в колбе доводят до метки. Если раствор готовят на месяц, необходимо внести в колбу 150 г хлорида натрия и хранить в холодильнике.

3. Построение калибровочного графика. В 6 конических колб вместимостью 250 куб.см вносят пипеткой по 25 куб.см щелочного раствора феррицианида и по 7,0; 7,5; 8,0; 8,5; 9,0; 9,5 куб.см стандартного раствора глюкозы. Из бюретки соответственно приливают 9,0; 8,5; 8,0; 7,5; 7,0; 6,5 куб.см дистиллированной воды, тем самым доводят объем жидкости в каждой колбе до 41 куб.см.

Содержимое колбы нагревают до кипения и кипятят в течение 1 мин. Затем охлаждают и измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при 440 нм. Кювету подбирают такого размера, чтобы оптическая плотность была в пределах 0,3 - 0,6 для раствора, содержащего 8,5 куб.см глюкозы (на ФЭК-56 и КФК-2 этому соответствует кювета в 10 мм). Оптическую плотность измеряют в каждом растворе не менее трех раз, из полученных данных берут среднее арифметическое значение. По полученным данным строят калибровочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности, а на оси абсцисс - соответствующие этим значениям массы глюкозы в миллиграммах. Калибровочный график используется для определения редуцирующих веществ и общего сахара.

Расчет массы навески и ее растворение см. ГОСТ 5903 п. 3.3.1 и 6.1.3.2.

Проведение испытаний. В коническую колбу вместимостью 100 - 150 куб.см вносят пипетками 25 куб.см щелочного раствора феррицианида, 10 куб.см исследуемого раствора и 6 куб.см дистиллированной воды, затем содержимое колбы доводят до каления, кипятят точно 1 мин.

После охлаждения заполняют полученным раствором кювету и определяют оптическую плотность так же, как и при снятии калибровочного графика. По значению оптической плотности и калибровочному графику определяют соответствующее количество глюкозы.

Если значения оптической плотности будут за пределами 0,3 - 0,6, то анализ повторяют, соответственно изменив количество добавляемого к раствору феррицианида испытуемого раствора.

Обработка результатов. Массовую долю общего сахара в процентах, выраженную в сахарозе, вычисляют по формуле

a · V · V · 100 a · V · V

2 2

X = ------------------ = ---------------- (31)

m · V · V · 1000 10 · m · V · V

1 3 1 3

где m - масса навески, г;

а - масса глюкозы, полученная по калибровочному графику, мг;

V - вместимость мерной колбы, куб.см;

V - вместимость мерной колбы, в которой проводилась инверсия,

2

куб.см;

V - объем исследуемого раствора, взятый для инверсии, куб.см;

3

V - объем исследуемого раствора, взятый для анализа, куб.см;

1

1000 - коэффициент пересчета миллиграммов глюкозы в граммы.

Для пересчета общего сахара, выраженного в глюкозе, в общий

сахар, выраженный в сахарозе, полученное значение умножают на

коэффициент 0,95.

Массовую долю общего сахара (X в процентах, выраженную в

1

сахарозе, в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле

X · 0,95 · 100

Х = -------------- (32)

100 - W

где Х - массовая доля общего сахара, выраженная в глюкозе, %;

W - массовая доля влаги в исследуемом изделии, %.

Расхождение между результатами двух параллельных определений в одной лаборатории допускается не более 0,5%, в разных лабораториях - не более 1%. За конечный результат испытаний принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, вычисленное с точностью до 0,1%.