43. Сердечные гликозиды: идентификация с помощью методов качественного химического анализа. Биологическая стандартизация лрс и лс растительного происхождения.

Качественные реакции по обнаружению сердечных гликозидов. Пока не существует достоверных методов химического анализа сердечных гликозидов. Кроме того, нет и общепризнанных химических способов выявления молекул этих веществ. Поэтому используют качественные реакции на те или иные части молекулярной структуры кардиогликозидов.

А. Реакции на 5-членное лактонное кольцо:

Реакция Балье. Желтая пикриновая кислота в щелочной среде (пикрат натрия) при взаимодействии с сердечными гликозидами развивает оранжево-красное окрашивание. Теперь эта реакция положена также в основу фотоколориметрического количественного определения этих веществ. Поэтому ее, в этом смысле, можно считать одной из основных по выявлению сердечных гликозидов.

Реакция Легаля. Сердечные гликозиды при взаимодействии с нитропруссидом натрия окрашиваются в оранжево-красный цвет.

Реакция Кедде. Сердечные гликозиды с 3,5-динитробензойной кислотой в щелочной среде окрашиваются в красно-фиолетовый цвет.

Б. Реакции на стероидный «скелет» молекулы:

Реакция Либермана-Бурхардта. Упаренный сухой остаток извлечения из ЛРС растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (50:1). Через некоторое время (!) на краю пробирки появляется окраска: изменяющаяся от розовой к зеленой и синей.

Реакция Розенгейма. Сухой остаток извлечения растворяют в хлороформе и смешивают с 90% водным раствором трихлоруксусной кислоты. Появляется окраска, изменяющаяся от розовой до лиловой и синей.

В. Реакции на деоксисахара:

Реакция Келлер-Килиани. Сухой остаток извлечения из ЛРС растворяют в ледяной уксусной кислоте (со следами Fe₂(SO₄)₃) и по стенке пробирки осторожно вливают 1-3 мл концентрированной H₂SO₄ (со следами Fe₂(SO₄)₃). На границе двух слоев образуется бурое кольцо, а верхний слой через некоторое время окрашивается в сине-зеленый цвет. Эта реакция положительна только в случае, если дезоксисахар в молекуле кардиогликозида находится в свободном состоянии или занимает крайнее (неприкрытое другими моносахарами) положение в гликозильной цепочке.

Реакция Пезеца. При нагревании раствора раствора кардиогликозида с ксантгидролом (или иначе дибензо--пиранолом) в присутствии уксусной кислоты и при последующем добавлении нескольких капель H₂SO₄ (или H₃PO₄) появляется красное окрашивание.

Реакция с нитрофенилгидразином. Если известно, что дезоксисахара в кардиогликозиде «закрыты», то проводят предварительный гидролиз их с помощью трихлоруксусной кислоты, и появляющийся свободный дезоксисахар выявляют в реакции с нитрофенилгидразином и щелочью. Раствор при этом развивает голубую окраску.

Г. Реакция на 6-членное лактонное кольцо:

Реакция Татье. К спиртовому извлечению прибавляют 2-3 капли концентрированной соляной кислоты со следами хлорида железа (Fe³⁺) и нагревают. Агликоны буфадиенолидов дают красное окрашивание.

Определение активности сердечных гликозидов и стандартизация ЛРС. Активность сердечных гликозидов в ЛРС, в лекарственных формах и в препаратах определяют биометодом. Активность устанавливают, сравнивая опытный образец с препараратом-стандартом (кристаллическим сердечныным гликозидом с известным количеством единиц действия) и выражают в особых единицах действия. Таковыми являются: кошачьи единицы действия (КЕД), голубиные единицы действия (ГЕД) или лягушачьи единицы действия (ЛЕД) – в зависимости от того, сердца каких из этих животных используют для испытания активности ЛРС. В результате этих испытаний устанавливают наименьшие дозы стандарта и испытуемого препарата, которые вызывают систолическую остановку сердца. Выражают пересчет на 1 г препарата.

Валор – это количество единиц действия в 1 г ЛРС.