Радиоиммунный метод (рим)
Сущность метода:метод позволяет в любом биологическом субстрате (моче, крови и т.д.) определять ничтожно малые концентрации растворимых антигенов, продукты метаболизма микроорганизмов, гормоны и пр. на основе конкуренции с радиоактивным антигеном.
Этапы постановки реакции
1. Стандартное количество антигена, идентичного меченому радиоактивной меткой (например, I123,I131, либо другими изотопами) антигену, наливают в пробирку.
2. Добавляют стандартное количество иммунной сыворотки, специфичной антигену. 70- 80% меченого антигена связывается при этом с антителами, образуя радиоактивный преципитат.
3. Добавляют субстрат, исследуемый на присутствие предполагаемого антигена. Если в субстрате есть антиген, идентичный меченому, то он конкурирует с ним, отнимая антитела. Радиоактивность преципитат при этом снижается.
Чем больше в субстрате антигена, тем меньше радиоактивность преципитата.
Приложение 12
Иммуноферментный метод
Сущность метода: конъюгат, образованный антителами, фиксированными на стенке лунки полистироловой пластины, и антигеном, взаимодействует с антителами, мечеными ферментом (чаще всего пероксидазой хрена) и также остаются на стенке пробирки. Не фиксированные (не отреагировавшие) субстраты сливаются из лунки и заменяются хромогеном с субстратом для индикации данного фермента. К примеру, хромогеном может служить ортофенилендиамин, субстрат для пероксидаз - перекись водорода.
Если в исследуемом субстрате были антигены, идентичные антителам, то энзим фиксируется на стенке лунки, разлагает перекись водорода и выделившийся кислород окрасит хромоген в желтый цвет.
Приложение 13
Метод иммуноблоттинга
для выявления антител в сыворотках крови больных к определенным антигенам возбудителя
Принцип метода:
1. Разделенный с помощью электрофореза комплекс антигенов в испытуемом субстрате наносят на полоску из нитроцеллюлозы. При этом разные антигены в силу разницы в электрофоретической подвижности располагаются в различных участках полоски.
2. Дальнейшее сравнительное исследование проводят по схеме сопоставления анализируемого образца с эталоном.
Приложение 14
Вопросы тестового контроля усвоения темы
1. Токсигенность возбудителя дифтерии выявляют с помощью реакции:
а) реакция агглютинации
б) кольцепреципитации
в) преципитации в геле
г) флоккуляции
2. Активность антитоксических сывороток измеряется в:
а) МЕ
б) LD
в) Lt
3. Определение активности антитоксических сывороток проводят с помощью реакции:
а) агглютинации
б) кольцепреципитации
в) преципитации в геле
г) флоккуляции
4. Для получения лечебной противоботулинической антитоксической сыворотки иммунизируют:
а) лошадей
б) баранов
в) кроликов
5. Для получения лечебной противоботулинической антитоксической сыворотки используют:
а) возбудителей ботулизма
б) ботулинический экзотоксин
в) ботулинический анатоксин
6. Укажите, что используют для создания активного антитоксического иммунитета против дифтерии:
а) убитую вакцину
6) антитоксическую сыворотку
в) анатоксин
г) токсин
7. Укажите, что используют для создания пассивного антитоксического иммунитета против дифтерии:
а) убитую вакцину
6) антитоксическую сыворотку
в) анатоксин
г) токсин.
8. Реакция нейтрализации токсина антитоксином на животных не используется с целью:
а) диагностики
б) индикации токсинов в исследуемом материале
в) титрования антитоксической сыворотки.
9. Для постановки р. Вассермана с целью серодиагностики необходимо иметь:
а) диагностикум
б) гемолитическую сыворотку
в) исследуемую сыворотку
г) физиологический раствор
д) комплемент
е) эритроциты барана
ж) все выше перечисленное
10. Лаборант перед постановкой РСК забыл прогреть сыворотку больного. Вследствие этого реакция будет:
а) будет гемолиз эритроцитов
б) будет агглютинация эритроцитов
11. Для постановки РСК в качестве источника комплемента обычно используется:
а) сыворотка крови барана
б) сыворотка крови морской свинки
в) любая свежая сыворотка
12. Титром преципитирующей сыворотки называется:
а) минимальное количество антигена, которое можно выявить с ее помощью
б) максимальное разведение сыворотки, при котором еще идет реакция преципитации
в) разведение сыворотки, при котором выпадает наибольшее количество преципитата
13. В реакции преципитации участвуют антигены:
а) растворимые
б) корпускулярные
в) любые
14. К реакциям с использованием меченых АТ не относят:
а) РНГА
б) радиоиммунный анализ
в) ИФА (иммуноферментный)
г) РИФ
15. При РА наблюдается эффект:
а) хлопья (зерна) с просветлением суспензии
б) помутнение
в) задержка гемолиза
г) гемолиз
д) зонтик
е) пуговка
ж) изменение окраски в лунке планшета
16. При РНГА наблюдается эффект:
а) хлопья (зерна) с просветлением суспензии
б) помутнение
в) задержка гемолиза
г) гемолиз
д) зонтик
17. При ИФА наблюдается эффект:
а) хлопья (зерна) с просветлением суспензии
б) помутнение
в) задержка гемолиза
г) гемолиз
д) зонтик
е) пуговка
ж) изменение окраски в лунке планшета
РЕКОМЕНДУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
Основная
1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2005. С. 322-350.
2. ПоздеевO.K. Медицинская микробиология (под ред. Покровского В.И.). М., 2006.
Дополнительная:
1. Биргер М.О. (ред.) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М., 1982.
2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С-Пб. 2002. С. 228-239.
3. Медицинская микробиология. Под ред. Королюка А.М., Сбойчакова В.Б. С-Пб, 2002. С. 101-106.
4. Медицинская микробиология, (под ред. Покровского В.И., Поздеева О.К.) М.М., 1999. С. 126-136.
5. Райкис Б.Н., Пожарская В.О., Казиев А.Х. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией. М., 2002. С. 221-262.