Бактериологического исследования (начальный этап)
Материал
1.Рвотные массы
4.Кровь 6.Отделяемое ран
2.Промывные воды
желудка (дефибриниров.)
3.Испражнения
5.Спинномозговая жидкость
1-2г
или мл
первая
среда
обогащения 1 мл
50
мл 1% п.в. Э.С.
Щ.А.М.
с 1,5% NaCl
1-й день через
6-8 часов через 6-8 часов
исследования инкубации при инкубации при
37оС 9
мл 37оС
п.в.
МПБ с с 1,5%
1,5%NaCl
NaCl
Э.С.
вторая среда
обогащения
10 мл 1% п.в. Щ.А.М.
Щ.А.М. Щ.А.М.
вторая среда
обогащения
1% п.в. с
1,5% NaCl
__________________________________________________________________
1-й день 1. Посев на щелочной агар (Щ.А.М.) и на одну элективную среду
(Э.С.)
2-й день 2. Отбор колоний, подозрительных на вибрионы с посевов
предыдущего дня:
а) подозрительные на холерные вибрионы колонии агглютинируют холерными 01, RО и 0139 сыворотками; при
положительных результатах проводят исследования, направленные на выделение и идентификацию возбудителя холеры.
б) подозрительные на холерные не 01 группы и др.виды вибрионов колонии на щелочном агаре и элективной среде отсеивают одной петлей на среду Ресселя и в 1% пептоновую воду без NaCl и с 5-10 % NaCl.
3-й день 1. Изучение посевов со 2-го пептона и выделение подозрительных
колоний (культур) проводят так же, как и с 1-го пептона.
2. Учет роста культур в 1% пептонной воде без NaСl и на среде
Ресселя.
3. Постановка пробы на индофенолоксидазу с культурой со среды Ресселя и реакция агглютинации с холерным 01 и 0139 сыворотками на стекле с культурами, выросшими в 1% п.в. без NaCl и давшие характерные изменения на среде Ресселя.
4. Изучение морфологии клеток в мазках, окрашенных по Граму.
5. Посев отобранных культур (галофильных вибрионов) в дифференциально-диагностические среды, содержащие 1,5% NaCl.
6. Определение чувствительности культур к вибриостатику 0/129.
4-й день 1. Учет результатов тестов идентификации. Определение вида выделенных культур вибрионов.
2. Идентификация культур, выделенных со второго пептона.
5-й день Учет результатов исследования. Выдача ответа (окончательного).
__________________________________________________________________
Примечание: в связи с высокой энергией роста холерных вибрионов учет результатов на каждом этапе проводят несколько раз, через 4-8 часов.
Приложение №10
Ускоренный метод диагностики холеры
Вид:
Микроскопическое изучение Кал, рвотные
массы, желчь,
(рисового
отвара)
I этап:
Грам «- » вибрионы Раздавленная капля Иммунофлюоресценция
Подвижность РИФ, РНИФ
Посев на комплект сред:
Б/фаг
МукарджиIV
Пептон 1% пепт. 1% пепт. 5% кров. Щелочной МПА с
1% вода вода + вода + МПА с дисками антибиотиков
01 сывор. 0,5% эритроцитами (полимиксин) и б/фагом
крахмала барана
II этап: Учет по принципу I этапа каждые 4-6 часов в течение суток.
Пленчатый рост Агглютинат 01 При добавлении Гемолиз Индивид. рез-ты
Грам «-» вибрион вибриона йода: V.eltor Х.в. – чувств к
Подвижны Нет его – при Нет синевы при Нет его - полимиксину и
не 01 вибрионах х.в. 01 холерный б/фагу;
Синева – при вибрион Эль-Тор – нет
вибр. Эль-Тор.
За сутки этим методом можно получить окончательные результаты