III. Биологические пробы

- При амебиазе – это энтеральное заражение 2-3 недельных крыс, котят, щенков, морских свинок.

- При лямблиозе - заражение белых мышей.

- При балантидиазе - заражение 2-3 недельных крысят, котят и т.п.

IV. Иммунологические иссдедования при кишечных протозоозах:

При амебиазе можно выполнять р.преципитации, иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию энзимомеченных антител, РИФ или РНИФ.

Приложение № 4

СХЕМА ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ТОКСОПЛАЗМОЗА

Материал исследования: кровь, сыворотка крови, спинномозговая жидкость, пунктат лимфатических узлов, моча, кал, мокрота, менструальные выделения; легкие; из абортивного материала - плацента, околоплодная жидкость; из органов трупа - головной мозг, кусочки печени, селезенки.

Методы исследования:

1. Паразитоскопический с окраской препарата по Романовскому-Гимзе, после фиксации в жидком фиксаторе.

Морфология токсоплазм зависит от стадии их развития.

- Свободная особь - трофозоит. Последний имеет аркоподобную форму.

Один конец трофозоита заострен, в нем расположен аппарат пенитрации коноид. Второй конец - округлый, ближе к нему расположено круглое ядро.

- Псевдоциста - скопление токсоплазм в клетке организма хозяина.

- Циста — структура, образованная токсоплазмами, с плотной оболочкой. Зоиты в цисте лежат так плотно, что при окраске видны только красного цвета (отсюда сравнение цисты с «банкой зернистой икры»).

- Форма эндодиогении - в период продольного деления токсоплазм можно увидеть 2 и больше дочерние особи, лежащие внутри материнской клетки. Она напоминает связку бананов. 1-4 формы токсоплазм – это результат их бесполого цикла развития, который они проходят в организме промежуточных хозяев, в том числе и человека.

Кроме того, существует другая морфологическая форма токсоплазм, образующаяся после слияния половых клеток в слизистой оболочке кишечника, кошки – ооциста. Она дозревает во внешней среде, в почве, в теплое время года, при повышенной температуре. Из созревшей ооцисты выходят инфекционные спорозоиты.

2. Паразитологический метод. Токсоплазмы - абсолютные паразиты. Поэтому их культивируют в развивающихся куриных эмбрионах, культуре тканей (лучше человеческих фибробластах - абортивных), в брюшной полости белых мышей.

3. Иммунологический метод. Постановка иммунологических реакций целесообразна с конца первой - начала второй недели заболевания. Чаще применяют ИФА – иммуноферментный анализ с использованием готовых тест-систем, где в лунках иммунологического планшета адсорбирован токсоплазменный антиген. Методика позволяет проводить как качественное, так и количественное исследование уровня антител в сыворотках заболевшего. Кроме того, есть возможность выявления классов иммуноглобулинов - IgM и IgG, что позволяет определить давность инфицирования.

4. Молекулярно-биологический метод – пцр (полимеразная цепная реакция).

ПЦР позволяет в краткие сроки выявить ДНК токсоплазмы в исследуемом материале. Положительная ПЦР свидетельствует о нахождении возбудителя в организме.

Внутрикожная аллергическая проба (ВКП)

Выполняют по общим правилам: в кожу ладонной поверхности предплечья вводят 0,1 мл токсоплазмина - аллергена. На расстоянии 5-7 см, другим шприцем вводят 0,1 мл физраствора (контроль). Руку нельзя мочить. Учет через 24, 48 часов.

Оценка результатов: в положительных случаях на месте введения аллергена появляется гиперемия и инфильтрация кожи. Размер очага покраснения, инфильтрации у больных должны быть не менее 10 мм в диаметре.

- Другие варианты результатов ВКП:

Реакция отрицательная: гиперемия, инфильтрат отсутствуют или меньше 10 мм в диаметре.

Реакция слабоположительная: ++ гиперемия, инфильтрат от 10-15 мм.

Реакция положительная: +++ гиперемия, инфильтрат от 15 до 20 мм.

Реакция резко положительная: ++++ гиперемия, инфильтрат более 20 мм.

ВКП остается положительной пожизненно.