- •Государственное бюджетное образовательное учреждение
- •5.2. Задания для сдс во вне учебное время:
- •Тестовый контроль итогового уровня:
- •9.Учебно-материальное обеспечение:
- •9.1. Источники информации:
- •9.2. Программное обеспечение и Интернет-ресурсы
- •Микробиологическая характеристика и диагностика малярии Дифференциальная диагностика малярийных плазмодиев в мазке крови, окрашенном по Романовскому – Гимзе
- •Эритроцитарные стадии развития включают: - самые ранние - кольцевидные трофозоиты (кольца),
- •Некоторые отличительные признаки малярийных плазмодиев в толстой капле крови (при окраске по Романовскому-Гимза)
- •Приложение № 2
- •Trypanosoma rhodesiense
- •Приложение № 3 простейшие паразиты кишечника Видовой состав, некоторые биологические свойства
- •Методы обнаружения паразитических простейших кишечник
- •I. Паразитоскопический метод
- •1.2. Приготовление нативного витально-окрашенного препарата:
- •1.3. Приготовление «постоянного» препарата:
- •II. Паразитологическое исследование:
- •III. Биологические пробы
- •IV. Иммунологические иссдедования при кишечных протозоозах:
- •Методы исследования:
- •4. Молекулярно-биологический метод – пцр (полимеразная цепная реакция).
- •Приложение № 5
- •Материал исследования:
- •Методы исследования:
- •1. Паразитоскопический метод.
- •II. Паразитологический метод:
- •III.Серологический метод:
- •IV. Биологический метод:
- •Приложение № 6 Лабораторная диагностика трихомоноза мочеполовых путей
- •Методы исследования:
Методы обнаружения паразитических простейших кишечник
I. Паразитоскопический (протозооскопический) |
II. Паразито логический |
III. Иммунологический |
IV. Биологический |
-нативные препараты; нативные препараты с витальной окраской; фиксированные, постоянные препараты. |
Культивирова ние на питательных средах. |
РСК РП, РИФ, ИФА Аллергические пробы (ВКП). |
Заражение животных.
|
I. Паразитоскопический метод
1.1. Приготовление нативного неокрашенного препарата:
- на предметное стекло нанести каплю прозрачного исследуемого материала (водянистые, слизистые фекалии; содержимое двенадцатиперстной кишки и т.д.)
- Если материал недостаточно прозрачен - добавить 1 каплю физ. раствора, размешать;
- сверху положить чистое покровное стекло;
-исследовать тотчас, поместив препарат под объектив на столик-термостат.
1.2. Приготовление нативного витально-окрашенного препарата:
Для этого используют растворы кислых или основных красителей в физ.растворе. Из кислых красителей чаще используют трипановый синий (1:5000-1:10000), из основных - янусовый зеленый (1:10000).
Мазок готовят обычно, добавляя в место физ.раствора краситель.
Для выявления цист лучше использовать раствор Люголя. Последний убивает вегетативные формы паразитов и позволяет идентифицировать только цисты. Исследования проводят с объективом х 8 или x 40 и окуляром х 10.
1.3. Приготовление «постоянного» препарата:
Правила приготовления мазка обычные. Главное отличие - стремление сохранить влажность препарата. Его фиксируют влажным, фиксирующую жидкость подогревают до 40-50°С. Продолжительность фиксации 15 минут. Окрашивают препарат железным гемотоксилинэозином:
- мазок погружают в 2,5 % раствор железоаммиачных квасцов на 12 часов;
- трехкратно ополаскивают водой;
- окрашивают в смеси гемотоксилина, спирта, дистиллированной воды 1-2 часа;
- избыток красителя удаляют в 1% растворе железоаммиачных квасцов;
-15-20 минут промывают в проточной воде, высушивают, микроскопируют с иммерсией.
II. Паразитологическое исследование:
Среды для культивирования могут быть однофазными, то есть жидкими или плотными. В двухфазных средах - плотная основа включает свёрнутый яичный белок, сыворотку крови, агар, а на неё наслаивают жидкую часть среды.
Основными ингредиентами питательных сред являются: нативная сыворотка крови, яичный белок, физиологический раствор с добавлением буферных растворов солей. Улучшают рост на средах такие вещества, как сахар, аминокислоты, нуклеиновые кислоты, витамины.
Среды стерилизуют в автоклаве при +110 - +120°С однократно или в аппарате Коха трехкратно - 3 дня подряд по 1 часу. Нативную сыворотку инактивируют, нагревая в водяной бане до +56°С 30 минут. Коагуляцию плотной основы сред (сывороточной, яичной) проводят при + 80°С. Большая часть паразитов кишечника растет при + 37 °С.
Для культивирования простейших кишечника используют следующие питательные среды:
- Среда Павловой (в ее составе - хлористый натрий, одно- и двузамещенный фосфорнокислый калий и натрий, соответственно; дистиллированная вода, раствор стерилизуют в автоклаве, разливают в пробирки и после охлаждения добавляют лошадиную сыворотку);
- Среды с печеночным экстрактом (физиологический раствор, МПБ, печеночный экстракт, глюкоза, двузамещенный фосфорнокислый натрий и однозамещенный фосфорнокислый калий). После стерилизации в автоклаве добавляют нативную сыворотку крупного рогатого скота;
- Простая сывороточная среда: смесь из стерильного физиологического раствора и 1 части нормальной лошадиной сыворотки.
Кроме указанных существует множество других сред, прописи которых представлены в кн.: Практическая паразитология. Под ред.Д.В. Виноградова – Волжинского. Л., 1977, с.72-76. В кн.: Руководство по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней. Под ред. Ю.С. Кривошеина. Киев, 1986, с.282.