I. Паразитоскопический метод

1.1. Приготовление нативного неокрашенного препарата:

- на предметное стекло нанести каплю прозрачного исследуемого материала (водянистые, слизистые фекалии; содержимое двенадцатиперстной кишки и т.д.)

- Если материал недостаточно прозрачен - добавить 1 каплю физ. раствора, размешать;

- сверху положить чистое покровное стекло;

-исследовать тотчас, поместив препарат под объектив на столик-термостат.

1.2. Приготовление нативного витально-окрашенного препарата:

Для этого используют растворы кислых или основных красителей в физ.растворе. Из кислых красителей чаще используют трипановый синий (1:5000-1:10000), из основных - янусовый зеленый (1:10000).

Мазок готовят обычно, добавляя в место физ.раствора краситель.

Для выявления цист лучше использовать раствор Люголя. Последний убивает вегетативные формы паразитов и позволяет идентифицировать только цисты. Исследования проводят с объективом х 8 или x 40 и окуляром х 10.

1.3. Приготовление «постоянного» препарата:

Правила приготовления мазка обычные. Главное отличие - стремление сохранить влажность препарата. Его фиксируют влажным, фиксирующую жидкость подогревают до 40-50°С. Продолжительность фиксации 15 минут. Окрашивают препарат железным гемотоксилинэозином:

- мазок погружают в 2,5 % раствор железоаммиачных квасцов на 12 часов;

- трехкратно ополаскивают водой;

- окрашивают в смеси гемотоксилина, спирта, дистиллированной воды 1-2 часа;

- избыток красителя удаляют в 1% растворе железоаммиачных квасцов;

-15-20 минут промывают в проточной воде, высушивают, микроскопируют с иммерсией.

II. Паразитологическое исследование:

Среды для культивирования могут быть однофазными, то есть жидкими или плотными. В двухфазных средах - плотная основа включает свёрнутый яичный белок, сыворотку крови, агар, а на неё наслаивают жидкую часть среды.

Основными ингредиентамипитательных сред являются: нативная сыворотка крови, яичный белок, физиологический раствор с добавлением буферных растворов солей. Улучшают рост на средах такие вещества, как сахар, аминокислоты, нуклеиновые кислоты, витамины.

Среды стерилизуют в автоклаве при +110 - +120°С однократно или в аппарате Коха трехкратно - 3 дня подряд по 1 часу. Нативную сыворотку инактивируют, нагревая в водяной бане до +56°С 30 минут. Коагуляцию плотной основы сред (сывороточной, яичной) проводят при + 80°С. Большая часть паразитов кишечника растет при + 37 °С.

Для культивирования простейших кишечника используют следующие питательные среды:

- Среда Павловой(в ее составе - хлористый натрий, одно- и двузамещенный фосфорнокислый калий и натрий, соответственно; дистиллированная вода, раствор стерилизуют в автоклаве, разливают в пробирки и после охлаждения добавляют лошадиную сыворотку);

- Среды с печеночным экстрактом(физиологический раствор, МПБ, печеночный экстракт, глюкоза, двузамещенный фосфорнокислый натрий и однозамещенный фосфорнокислый калий). После стерилизации в автоклаве добавляют нативную сыворотку крупного рогатого скота;

- Простая сывороточная среда: смесь из стерильного физиологического раствора и 1 части нормальной лошадиной сыворотки.

Кроме указанных существует множество других сред, прописи которых представлены в кн.: Практическая паразитология. Под ред.Д.В. Виноградова – Волжинского. Л., 1977, с.72-76. В кн.: Руководство по медицинской микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней. Под ред. Ю.С. Кривошеина. Киев, 1986, с.282.