Приложение № 5

Схема микробиологической диагностики лейшманиоза

Возбудитель: кожного лейшманиозаLeishmania tropica

висцерального лейшманиозаLeishmania donovani

Материал исследования:

При кожном лейшманиозематериал берут из нераспавшихся бугорков или из краевого инфильтрата вокруг язвы, а также в виде серозно-кровянистой жидкости из язв. Для этого пораженный участок обескровливают, сжимая его большим и указательным пальцами, после чего надрезают эпидермис стерильным скальпелем и его концом соскабливают кусочки ткани со стенок и дна надреза. Соскоб и капли серозной жидкости переносят на стекло и осторожно растирают, готовят равномерный мазок.

При висцеральном лейшманиозе: для исследования берут пунктаты лимфатических узлов, костного мозга. У детей до года последний получают из берцовой кости, у старших детей - из подвздошной, у взрослых - из грудины.

Методы исследования:

1. Паразитоскопический метод.

Мазок готовят по общим правилам, фиксируют химическими фиксаторами, окрашивают по Рамоновскому-Гимзе. Микроскопию вьшолняют с иммерсией.

В препарате видны лейшманиальные (висцеральные или внутриклеточные) овальные, округлые формы паразита с ядром без жгутиков. При распаде пораженной клетки можно увидеть свободные внеклеточные особи.

II. Паразитологический метод:

Материал для посева следует брать после обязательной обработки инфильтрата или язвы спиртом и раствором йода. Взятый материал засевают на одну из следующих питательных сред:

• Среда NNN(Нови–Novy, Ниль-Nile, Николль-Nicolle) вода, поваренная соль, агар-агар, дефибринированная кровь кролика.

• Среда Крюкова. Состав среды тот же, что и вышеуказанной, но вместо свежей используют перевар крови.

• Среда Кузнецова. Состав подобен предшествующим, но кроме указанных

ингредиентов добавляют лактозо-пептонную жидкость.

После посева ватные пробки пробирок либо заливают горячим парафином, либо заменяют резиновыми и посевы выдерживают при +22, +25°С 3-4 дня.

В препаратах из культурального субстрата роста на средах видны лептомонадныеформы, веретенообразные с четким ядром, кинетобластом (ядрышко) и лейшманиит.

В старых культурах видны розеткообразные скопления паразитов со жгутиками, обращенными к центру и друг другу.

При окраске их по Романовскому - Гимзе тела паразитов голубые, трофонуклеус, кинетопласт, жгутики красные.

III.Серологический метод:

Реакции связывания комплемента (РСК), агглютинации (РА), пас сивной гемагглютинации (РПГА), иммунофлюоресценции (РИФ, РНИФ) используют при проведении эпидемиологических исследований в эндемичных районах лейшманиоза.

В настоящее время наиболее чувствительными считают: РНИФ, ИФА или иммунопероксидазную пробу (ИПП) с энзимомеченными антителами (РЭМА). В качестве антигена в них используют 15-30 дневные культуры лейшмании Доновании.

IV. Биологический метод:

Животных белых мышей, золотистых хомяков заражают материалом от больного внутрисердечно, внутрипеченочно, внутримышечно, внутривенно.

При микроскопии мазков отпечатков из органов забитых особей находят возбудителей в селезенке, костном мозге, печени, лимфоузлах.