Работа № 3 «Влияние кислой среды на активность фермента»

1. Налить 10 мл 3% H₂O₂ в цилиндр объемом 100 мл и добавить 50 мл дистиллированной воды.

2. Добавить 10 мл 1 молярного раствора HCI.

3. Вылить получившийся раствор в колбу Эрленмейера, положить в нее брусок для магнитной мешалки, поставить колбу на магнитную мешалку, зафиксировать горловину зажимом (рис.).

4. Добавить 1 мл « печеночного сока» и немедленно закрыть колбу пробкой

( предварительно смазанной глицерином).

5. Немедленно начать измерения (время работы 60 сек).

6. Включить магнитную мешалку.

7. Зарисовать в тетрадь полученный график.

Наблюдения и результаты:

Выделение O₂ не наблюдается, давление в колбе остается постоянным. Кривая давления не возрастает, что говорит об отсутствии активности каталазы при рН < 7.

Работа № 4 «Влияние высокой температуры на активность фермента»

1. Налить 10 мл 3% H₂O₂ в цилиндр объемом 100 мл и добавить 50 мл дистиллированной воды.

2. Вылить получившийся раствор в колбу Эрленмейера, положить в нее брусок для магнитной мешалки, поставить колбу на магнитную мешалку, зафиксировать горловину зажимом (рис.).

3. Добавить 1 мл « печеночного сока», предварительно прогретого на водяной бане и немедленно закрыть колбу пробкой (смазанной глицерином).

4. Немедленно начать измерения (время работы 60 сек).

5. Включить магнитную мешалку.

6. Зарисовать в тетрадь полученный график.

Наблюдения и результаты:

Выделение O₂ не наблюдается. Кривая давления не возрастает, что говорит о потере ферментативной активности при нагревании вследствие денатурации.

Работа № 5 «Влияние низкой температуры на активность фермента»:

1. Налить 10 мл 3% H₂O₂ в цилиндр объемом 100 мл и добавить 50 мл дистиллированной воды.

2. Вылить получившийся раствор в колбу Эрленмейера, положить в нее брусок для магнитной мешалки, поставить колбу на магнитную мешалку, зафиксировать горловину зажимом (рис.).

3. Добавить 1 мл охлажденного « печеночного сока» и немедленно закрыть колбу пробкой (смазанной глицерином).

4. Немедленно начать измерения (время работы 120 сек).

5. Включить магнитную мешалку.

6. Зарисовать в тетрадь полученный график.

Наблюдения и результаты:

В колбе наблюдается отчетливое выделение O₂. Кривая давления резко возрастает, но затем вертикально падает из-за того, что резиновую пробку выбило давлением. Резкое охлаждение, в отличие от нагревания, дезактивирует каталазу лишь временно. При нагревании раствора до 37^о активность фермента возрастает.

Клинико – диагностическое значение:

1. Каталаза является ферментом, простетическая группа которого идентична гему. В крови каталаза содержится почти исключительно в строме эритроцитов.

1) Активность фермента крови выражают каталазным числом (количество мг Н₂О_2, которое разлагается 1 мкл исследуемой крови). В норме каталазное число составляет 10 – 15 единиц. Определение активности каталазы имеет значение для диагностики рака, анемии, туберкулеза. При этих заболеваниях активность фермента снижается.

2) 3% раствор Н₂О₂ применяют в качестве дезинфицирующего и дезодорирующего средства для промываний и полосканий при воспалительных заболеваний слизистых оболочек (стоматиты, ангина), обработки ран и т.п.

2. Термолабильность ферментов учитывается в практической медицине в следующих случаях:

1) для рационализации терапевтических приемов при развитии воспалительного процесса, сопровождающегося изменением терморегуляции (повышение температуры тела при лихорадочных состояниях);

2) снижение интенсивности метаболических процессов путем гипотермии при выполнении тяжелых хирургических манипуляций с целью уменьшения осложнений (кардиохирургия).

3) Снижение активности ферментов при охлаждении позволяет сохранять жизнеспособность клеток, тканей, органов (кровь, почки и др.) для трансплантации (метод низкотемпературной консервации

3. Ферменты обычно наиболее активны в пределах узкой зоны рН. рН крови человека колеблется в пределах от 7,37 до 7,43; изменение этих значений всегда критично для витальных функций организма. Сдвиг рН в кислую сторону называется АЦИДОЗ, в щелочную – АЛКАЛОЗ. Развитие этих состояния требует немедленного оказания медицинской помощи.