II. Создание глоссария по теме занятия

Практическое занятие № 10

Тема: «Тканевое дыхание. Компоненты и организация дыхательной цепи.

Качественные реакции на витамины в1 и в2»

(лабораторно-практическое занятие)

Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний:

1. Биологическое окисление. Классификация оксидоредуктаз: оксидазы, дегидрогеназы, пероксидазы, оксигеназы.

2. Организация дыхательной цепи митохондрий: мультиферментные комплексы, переносчики электронов.

3. Хемиосмотическая теория синтеза АТФ. Образование и использование электрохимического потенциала (Н+). Протонная АТФ-аза и транспортные системы митохондрий.

4. Окислительное фосфорилирование, коэффициент Р/О. Дыхательный контроль.

5. Ингибиторы дыхательной цепи и разобщители с окислительным фосфорилированием.

6. Энергетический обмен и теплопродукция.

Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы:

Работа №1. Качественная реакция на витамин В₁ (тиамин)

Принцип метода. Реакция основана на способности тиамина (В₁) окисляться в щелочной среде под действиемкрасной кровяной соли(феррицианид калия,K₃Fe(CN)₆) в тиохром, который обладает в ультрафиолетовых лучах сине-голубой флюоресценцией.

Порядок выполнения работы:В пробирку наливают 1 каплю 5% раствора тиамина (витамина В₁), прибавляют 5-10 капель 10% раствораNaOH, 1-2 капли 5% раствораK₃Fe(CN)₆ и взбалтывают. Прогрев флюороскоп в течение 5-10 мин., наблюдают сине-голубую флюоресценцию при облучении пробирки с раствором ультрафиолетовыми лучами. В выводах написать структурную формулу кофермента и указать связь с функционированием пируватдегидрогеназного комплекса и ЦТК.

Клинико-диагностическое значение: витамин В₁в виде своего пирофосфорного эфира (кофермент ТДФ) в организме человека в комплексе с другими коферментами – липоевой кислотой, Ко-А, НАД, ФАД – входит в состав полиферментного комплекса, осуществляющего окислительное декарбоксилирование α-кетокислот (в первую очередь, пировиноградной, а также α-кетоглутаровой), в результате чего образуется ацетил-КоА, который вступает в цикл трикарбоновых кислот (общий путь катаболизма). При недостаточном поступлении витамина В₁ в организм окисление пирувата нарушается, что приводит к развитию гипоэнергетических состояний и накоплению α-кетокислот в тканях. Авитаминоз В₁вызывает характерное поражение сердечно-сосудистой и периферической нервной системы, известное как заболевание «бери-бери».

Работа №2. Качественная реакция на витамин В₂ (рибофлавин)

Принцип метода. Окисленная форма витамина В₂представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В₂основана на способности его легко восстанавливаться, при этом витамин В₂изменяет свои физико-химические свойства. Источником водорода служит реакция взаимодействия соляной кислоты с металлическим цинком.

Порядок выполнения работы:В пробирку наливают 10 капель 0,025% раствора витамина В₂, добавляют 5 капельHcl(конц.) и 1 зернышко металлическогоZn.

Выделяющийся водород восстанавливает рибофлавин (раствор желтого цвета) через родофлавин (раствор розового цвета) в лейкофлавин (бесцветное соединение).

Сравните разные формы витамина В₂по флюоресценции в ультрафиолетовых лучах.

В выводах написать восстановленную и окисленную формулу кофермента и указать связь с функционированием дыхательной цепи митохондрий.

Клинико-диагностическое значение: Витамин В₂(рибофлавин) входит в состав коферментов флавиновых ферментов (ФАД и ФМН), которые участвуют в биологическом окислении, катализируя реакции дегидрирования. Типичным субстратом для флавиновых ферментов в процессе биологического окисления служит НАДН₂. При недостаточности рибофлавина в организме человека нарушаются окислительно-восстановительные процессы, что влечет возникновение характерных признаков гипо –и авитаминозов (поражение слизистых ротовой полости и губ, помутнение хрусталика, выпадение волос и др.).