Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Скачиваний:
99
Добавлен:
19.06.2017
Размер:
699.9 Кб
Скачать

Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы: Работа №1. Определение общего холестерина крови ферментативным методом

Принцип метода. Определение холестерина основано на использовании сопряженных ферментативных реакций, катализируемых холестеролэстеразой, осуществляющей гидролиз эфиров холестерина до свободного холестерина; холестеролоксидазой, осуществляющей превращение холестерина в холестенон с образованием Н2О2; пероксидазой, осуществляющей окисление перекисью 4-аминоантипирина и фенола с образованием окрашенного продукта розово-малинового цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации холестерина.

Реактивы:

А) Рабочий реагент - смесь лиофильно высушенных ферментов, буферного раствора, фенола, аминоантипирина

Б) Калибратор – калибровочный раствор холестерина 4,65 ммоль/л

Порядок выполнения работы:

1. 1 мл рабочего реагента наливают в пробирку №1 (опыт) и пробирку №2 (калибровочная проба), затем прогревают 5 минут при 370 С

2. В пробирку №1 (опыт) добавляют 0,01 мл сыворотки крови, в пробирку №2 (калибровочная проба) - 0,01 мл калибратора

3. Пробирки выдерживают 20 минут в термостате при 370 С

4. Измеряют оптическую плотность растворов на ФЭКе против Н2О при длине волны 490 нм в кювете 0,3 см

5. Расчет проводят по формуле: х = (Аопыт : Акалибр.) × 4,65 ммоль/л,

Где А – оптическая плотность растворов (показания ФЭКа)

Уровень холестерина в норме (сыворотка) – 3,63 - 8,03 ммоль/л

рекомендуемые пределы (желательные) для взрослых - < 5 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение. Гиперхолестеринемия – увеличение холестерина в крови, сопровождает гиперлипопротеинемии IIA, IIB, III типов; заболевания печени, холестаз, нефротический синдром, злокачественные опухоли поджелудочной железы и простаты, сахарный диабет и другие заболевания. Гиперхолестеринемия является фактором риска развития атеросклероза и одним их биохимических тестов патологии. Гипохолестеринемия наблюдается при болезнях печени (цирроз в поздней стадии заболевания, острая дистрофия печени), голодании, сепсисе, гиперфункции щитовидной железы и др.

Работа №2. Количественное определение лпнп в сыворотке крови

Принцип метода: метод основан на способности ЛПНП осаждаться в присутствии хлорида кальция и гепарина; при этом изменяется мутность раствора (гепарин способен образовывать с ЛПНП комплекс, который в присутствии хлорида кальция выпадает в осадок). По степени помутнения раствора и судят о концентрации ЛПНП в сыворотке крови.

Порядок выполнения работ:

  1. В пробирку вносят 2 мл 0,27% раствора Cacl2 и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают.

  2. Определяют оптическую плотность раствора (А1) против Н2О при длине волны 630 нм в кювете 0,5 см.

  3. Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют 0,04 мл (2 капли) 1% раствора гепарина, перемешивают.

  4. Ровно через 4 минуты снова определяют оптическую плотность раствора (А2) в тех же условиях.

  5. Расчет проводят по формуле: х = (А2 – А1)×100

Соседние файлы в папке Метод.рекомендации для студентов