«Классификация ферментов»

№ класса	Название класса	Кофакторы (коферменты, металлы)	Тип катализируемой реакции
1	Оксидоредуктазы	НАД, ФАД	Дегидрирование, окисление
2
3
4
5
6

Практическое занятие № 4

Тема: «Ферменты. Активность амилазы ( диастазы ) мочи »

(лабораторно-практическое занятие)

Мотивация: знание основных свойств ферментов необходимо для понимания условий функционирования ферментов в организме, изменения активности под влиянием различных факторов, определения активности ферментов для диагностики различных заболеваний, механизма действия ферментных препаратов

Цель обучения, воспитания и развития: закрепить представления о различии ферментного состава органов и тканей, органоспецифических ферментов, значении определения активности ферментов для диагностики заболеваний; первичных и вторичных энзимопатиях и актуальных вопросах энзимотерапии.

Задачи, обучения, воспитания и развития: студент должен

1. Уметь писать формулы:коферментов НАД, ФМН

2. Знать пределы физиологических колебаний биохимических показа­телей:

активность амилазы (диастазы) мочи.

3. Знать и уметь объяснять значения терминов: энзимодиагностика, энзимотерапия, энзимопатология, гиперферментемия, гипоферментемия

Этапы проведения занятия:

1. Вводная часть

2. Основная часть занятия: лабораторная работа, семинар (общие и индивидуальные задания для СДС)

3. Заключительная часть занятия (тест-контроль)

Задание на самоподготовку:

1. Изменение активности ферментов в онтогенезе и при болезнях. Первичные и вторичные энзимопатии. Биохимические механизмы развития патологий. Примеры заболеваний.

2. Энзимотерапия: использование ферментов, коферментов, ингибиторов ферментов в клинике. Иммобилизованные ферменты.

3.Определение активности ферментов в биологических жидкостях с целью диагностики заболеваний. Энзимодиагностика болезней миокарда, печени, органов пищеварения и др. (примеры)

Ориентировочная основа деятельности студентов (оод) для проведения лабораторной работы: Работа №1. Активность амилазы (диастазы) мочи

Принцип метода: Определение активности ферментов в биологических жидкостях (кровь, моча, слюна и др.) используется в клинике с целью постановки диагноза, наблюдения за эффективностью лечения и прогнозирования заболевания.

О количестве фермента чаще всего судят по их активности (скорости идущей реакции), которая в определенных условиях прямо пропорциональна концентрации фермента. Для выявления активности обычно определяют количество субстрата, изменяющегося под влиянием фермента в единицу времени или по количеству образующегося продукта реакции.

Метод определения активности амилазы мочи основан на определении времени, необходимом для полного расщепления крахмала в присутствии 1 мл мочи. Условно за единицу активности амилазы принимают количество фермента, расщепляющего 2 мг крахмала за 15 минут. Активность амилазы выражают количеством единиц в 1 мл мочи. В норме она составляет 1 – 2 ЕД.

Порядок выполнения работы: В пробирку вносят 2 мл 0, 1% раствора крахмала (содержится 2 мг крахмала), 1 мл 0,85 % раствора Nacl и помещают пробирку в термостат или водяную баню (38⁰ С) на 2 минуты. Не вынимая пробирку из бани, добавляют 0,5 мл мочи, перемешивают и отмечают время реакции. Через каждые 2-3 минуты на сухой чашке Петри смешивают 1 каплю 0,1% раствора J₂ в KJ с 1 каплей смеси из пробирки. При наличии крахмала окраска капли будет синей. По мере гидролиза крахмала амилазой мочи цвет капли будет изменяться (синий → фиолетовый → коричневый → желтый). При полном прекращении изменения окраски капли йода отмечают время реакции в минутах. Активность амилазы мочи рассчитывают по формуле: Х_ЕД = 15 : (Т×0,5) , где

Х – активность амилазы в 1 мл мочи

15 – время, необходимое для полного гидролиза 2 мг крахмала

0,5 – количество мочи, взятое для анализа

Т – время реакции в минутах.

В выводе дать расчет активности амилазы мочи, сравнить полученный результат с нормальными значениями.

Клинико-диагностическое значение: Моча здоровых людей обладает низкой амилазной активностью. Источником амилазы (диастазы) в моче является поджелудочная железа. Определение активности амилазы в крови и моче широко используется в клинике при диагностике острого панкреатита. В 1-е сутки заболевания амилазная активность увеличивается в крови и моче в десятки раз, затем постепенно возвращается к норме. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите (за счет амилазы слюнных желез)