- •1. Стафилококки. Лабораторная диагностика стафилококковой инфекции
- •2. 2. Стрептококки. Лабораторная диагностика стрептококковой инфекции.
- •9. Микобактерии. Лабораторная диагностика туберкулёза.
- •16. Бруцеллы. Лабораторная диагностика бруцеллёза.
- •12. Нейссерии. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции.
- •36. Лептоспиры. Лабораторная диагностика лептоспирозов.
- •32. Возбудитель сибирской язвы. Лабораторная диагностика сибирской язвы.
- •31. Возбудитель туляремии. Лабораторная диагностика туляремии.
- •6. Эшерихии. Лабораторная диагностика эшерихиозов.
- •10. Клостридии. Лабораторная диагностика клостридиозов.
- •7. Коринебактерии. Лабораторная диагностика дифтерии.
7. Коринебактерии. Лабораторная диагностика дифтерии.
Род Corynebarteriurn (от лат. Сoryne - булава) – Гр+ палочковидные бактерии, длиной 1–8 мкм и шириной 0,3–0,8 мкм, не образующие спор, не имеющие жгутиков. Содержат зерна волютина, расположенные чаще всего на концах палочек, они часто превышают размеры поперечника бактерии и придают вид булавы. Также имеются включения липидов и крахмала, который откладывается при недостатке кислорода.
В состав клеточной стенки входят специфические только для бактерий рода Corynebacterium липиды: эфиры коринемиколовой и коринемиколиновой кислот, димикола, фосфатиды маннозы и инозита.
В организме человека обитают условно-патогенные: С.diphtheriae, С.pseudodiphtheriticiim (hofmanii), С.xerosis, С.ulcerans. С.diphtheriae вызывает у человека дифтерию, другие являются возбудителями вторичных инфекций.
КОРИНЕБАКТЕРИЙ ДИФТЕРИИ С.diphtheriae.
Морфология. Прямые или слегка изогнутые палочки. В препаратах располагаются под углом друг к другу в виде букв L, V или китайских иероглифов. Зерна волютина (на концах палочек) выявляются при окраске синькой Леффлера или по методу Нейссера. Факультативные анаэробы, хорошо размножаются при свободном доступе кислорода. К питательным средам требовательны: не способны утилизировать азот из аммонийных соединений, требуют наличия почти всех АК, солей Mg, Zn, Cu, Fe; необходимы углеводы Þ используются среды, полученные на основе ферментативного расщепления белка (казеина, дрожжей) с добавлением крови или сыворотки. На поверхностях плотных сред дифтерийные палочки образуют темно-серые или черные колонии (биовары гравис, способны расщеплять крахмал, или миттис). Рост на скошенном сывороточном агаре сравнивают с шагреневой кожей, колонии не сливаются.
Расщепляют глюкозу и другие моно- и дисахариды с образованием кислоты без газа, восстанавливают нитраты, расщепляют цистеин.
Лизируются специфичны для отдельных видов вирулентными фагами, что позволяет устанавливать фаговары исследуемых культур.
АГ. Имеют белковую капсулу, которая содержит К-АГ. Определение этого АГа позволяет установить серовар (их более 10). Группоспецифический полисахарид АГ клеточной стенки дает перекрестные реакции с микобактериями, нокардиями.
Экология и распространение. Передается аэрозольным (воздушно-капельным) путем. В настоящее время часто регистрируется у взрослых (тяжелая формы). Токсигенность связана лизогенизацией специфическим профагом. Выделяясь в окружающую среду со слюной, пленками, дифтерийные палочки сохраняют жизнеспособность в течение нескольких дней. Хорошо переносят высыхание. Чувствительны к дезинфицирующим растворам, антибиоткам.
Патогенность и патогенез. Заболевание развивается у лиц, не имеющих антитоксического иммунитета. На месте внедрения (зев, гортань, трахея, реже – нос, ухо) развивается местный воспалительный процесс. Все патогенные виды обладают фимбриями Þ АДГЕЗИЯ к клеткам хозяина, они выявляются в РА трипсинизированных бараньих эритроцитов.
Токсигенность – способность секретировать гистотоксин, что проявляется в виде локальной воспалительной реакции и в общей интоксикации организма, особенно чувствительны к нему надпочечники, миокард, НС. Токсин блокирует синтез белка, что приводит к гибели клеток, возникает некроз и летальный исход.
Ферменты (гиалуронидаза, нейраминидаза,фибринолизин) обеспечивают распространение в тканях, но бактериемия клинически не проявляется.
Корд-фактор нарушает фосфорилирование и дыхание клеток микроорганизмов.
Иммунитет. Наиболее восприимчивы дети 1–4 лет. Вырабатывается не очень прочный антитоксический иммунитет, возможны повторные заболевания дифтерией. Невосприимчивость зависит главным образом от содержания в крови антитоксина и АТ (опсонины, преципитины, комплементсвязывающие). Уровень антитоксического иммунитета устанавливают, определяя в крови антитела в РНГА с эритроцитарным диагностикумом (эритроциты нагружены дифтерийным анатоксином). Титр 1:20 и выше Þ иммунность обследуемого. Такжеже применяется реакция Шика (внутрикожно вводят дифтерийный токсин, у неимунных людей – местная воспалительная реакция, при наличии антитоксина реакции нет).
Лабораторная диагностика. В диагностике дифтерии важное значение имеет микроскопический метод. Мазки из налетов зева и носа окрашивают метиленовым синим, по Нейссеру и Граму. Одновременно материал засевают на элективную и дифференциально–диагностическую среды. Выделив культуру, ее идентифицируют по культурально–биохимическим признакам. Затем определяют токсигенность, испытывая культуру на морских свинках или в реакции преципитации на пластинчатом фосфатно–пептонном агаре, подсевая ее бляшками к расположенной вдоль чашки полоске фильтровальной бумаги, смоченной антидифтерийной сывороткой.
Токсигенные штаммы коринебактерии дифтерии при внутрикожном введении вызывают местный некроз, а при подкожном – гибель животных с экссудацией в серозные полости и резкое увеличение надпочечников. Положительная реакция преципитации в агаре проявляется образованием на границе взаимодействия антитоксина и продуцируемого экзотоксина равномерно сливающихся полос преципитации или «стрел–усиков».
Экспресс–диагностика. Если прямой микроскопией мазков, окрашенных обычными способами, выявить коринебактерии дифтерии в материале не удается, то его берут тампоном со свернутой сывороткой (метод Фольгера). Тампон помещают в термостат для подращивания культуры и через 3–5 ч им делают мазки.
Профилактика и лечение. Для профилактики дифтерии используют адсорбированную коклюшно–дифтерийно–столбнячную вакцину (АКДС), содержащую в 1 мл 20 млрд микробных тел палочек коклюша, 30 АЕ (антигенные единицы) дифтерийного анатоксина, 10 АЕ столбнячного анатоксина. Вакцинацию начинают с 5–6–месячного возраста. Курс иммунизации состоит из трех внутримышечных инъекций по 0,5 мл препарата с интервалом 30–40 дней. Ревакцинацию проводят в 3 года, 6 и 11 лет. По эпидемическим показаниям вакцинируют все население, даже людей старше 50 лет.
Специфическое лечение проводится лошадиной антитоксической иммунной сывороткой, которую вводят дробно по методу Безредки в зависимости от тяжести заболевания в количестве от 10 000 до 250 000 АЕ Антибиотики и сульфаниламиды сокращают сроки бактериовыделения у реконвалесцентов и санируют организм здоровых бактерионосителей. Для этих целей назначают пенициллины, тетрациклины, эритромицин.