29.Ипользование метода тонкослойной хромотографии для разделения липидов.

В зависимости от природной неподвижной фазы тонкослойной хромотографии, хромотография может быть адсорбционной, распределительной, Молекулярно-ситовой и осадочной. Адсорбционная тонкослойная хромотография основана на различии в сродстве компонентов смеси к неподвижной фазе (сорбент) осуществляющего в результате перемещения подвижной фазы (элюента) под действием капиллярных сил по слою сорбента толщиной 0,1-0,5мм нанесенного на пластину. Хромотог проводит в закрытой камере, чтобы избежать испарение элюента. В зависимости от направления перемещения элюента по пластинке различают нисходящую, горизонтальную и восходящую. Используют готовые пластины типа сорбифол, силюфол. Для проведения анализа используют 1% испытуемые в-ва или смеси в-в в легколетучем растворителе. Хромотогр пластинку размельчают. На линию старта наносят 0,05мл испытуемого в-ва или смеси в-в. Если наносят несколько в-в, то расстояние между пробами должно составлять 1см. Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру с элюентом, с момента погружения возникает фронт смачивания, кот перемещается вверх по слою сорбента. При этом перемещаются исслед-ые в-ва, со скоростью зависящей от их коэффициента адсорбции. Когда фронт смачивания достигнет верхней границы хромотограф разделение заканчивается. В-ва, имеющие окраску обнаруживаются в виде отдельных пятен на хромотограмме. Если хромотография бесцветного в-ва, то их обнаруживают после спец-ой обработки. Положения пятна характеризуются Rf.Rf=расстояние пройденное в-вом от линии старта/расстояние пройденное элюентом от линии старта. ЗначениеRfзависит: 1)от степени родства, хромотографируемого органического соединения к сорбенту, 2)свойствами самого сорбента, 3)природой элюента. Идентификация нейтральных липидов: 1)элюент – петролейный эфир – этиловый эфир, укс-ая к-та, соотношение 80:20:1, 2) в качестве маркеров использ стеариновая к-та (15 капель) и оливковое масло (2 кап), 3)пластинку подсушиваем при комнатной темпер несколько минут и затем проносим через 20% р-р сульфата аммония. Далее помещаем в сушильный шкаф при темпер 160-180 на 5-15мин. Липиды образуют темные пятна. Далее определяютRfи по таблице проводим идентификацию липидов. Идентификация фосфо и глико липидов (полярные липиды): 1)элюент – хлороформ, этанол, вода, 65:25:4, 2)маркер – лецитин 2 кап, 3)пластинку подсушиваем при комнатной темпер несколько минут, затем помещаем в камеру с парами йода, липиды образуют темные пятна на желтом фоне. ПосчитываемRf и проводим идентификацию.

30.Регуляция биосинтеза аминокислот.

Аминокислоты с каждым годом находят все большее применение в качестве кормовых и пищевых добавок и приправ, сырья фармацевтической и парфюмерной промышленности. Все АК, из которых состоят белки, являются L-формами. Из 20 аминокислот – 8(изолейцин, лейцин, лизин, метионин, треонин, триптофан, валин, фенилаланин) незаменимы для человека. Около 30 % производимых АК используется в пищевой промышленности. Так, цистеин улучшает качество хлеба при выпечке, усиливает запах пищи. Глицин, обладающий освежающим, сладковатым вкусом, используется при производстве напитков. Глутаминовая кислота – для усиления вкуса и консервирования пищи. Ряд АК (аргинин, аспартат, цистеин, фенилаланин и др.) используют в медицине. Аминокислоты широко используются в химической и фармацевтической промышленности в качестве предшественников для производства детергентов, полиаминокислот, полиуретана и препаратов для сельского хозяйства. Получение аминокислот возможно несколькими путями: химическим синтезом, гидролизом природного белкового сырья и в биотехнологических процессах. Биотехнологическое получение АК включает в себя прямую микробную ферментацию, а также микробиол или ферментативный синтез из предшественников. Микробиологический метод получения АК, наиболее распространенный в настоящее время, основан на способности м/о синтезировать все L-аминокислоты, а в определенных условиях – обеспечивать их сверхсинтез. Биосинтез аминокислот в микробных клетках протекает в виде так называемых свободных АК, из которого в процессах конструктивного метаболизма синтезируются клеточные макромолекулы. Для синтеза всех белков требуется 20 АК. Пути синтеза большинства АК взаимосвязаны. При этом одни АК являются предшественниками для биосинтеза других. Пируват является предшественником аланина, валина, лейцина; 3-фосфоглицерат – серина, глицина, цистеина; щавелево-уксусная кислота – аспартата, аспарагина, метионина, лизина, треонина, изолейцина; α-кетоглутаровая кислота – глутамата, глутамина, аргинина, пролина; фосфоэнолпируват+эритрозо-4-фосфат – фенилаланина, тирозина, триптофана; 5-фосфорибозил-1-пирофосфат + АТФ -гистидина. Синтез каждой АК в микробных клетках реализуется в строго определенных количествах, обеспечивающих образование последующих АК, и находится под строгим генетическим контролем. Контроль осуществляется по принципу обратной связи на уровне генов, ответственных за синтез соответствующих ферментов (репрессия), и на уровне самих ферментов, которые в результате избытка образующихся аминокислот могут изменять свою активность (ретроингибирование). Данный механизм контроля исключает перепроизводство АК и также препятствует их выделению из клеток в окружающую среду.