Методична розробка по підготовці та роботі на лабораторному занятті №17 для студентів медичного факультету.
Тема: Серологічні реакції. Реакція преципітації.
Актуальність теми.
Обумовлена високою чутливістю реакції преципітації та широким використанням в медицині та біології.
1.2. Цілі вивчення теми.
1.2.1. Мета загальна.
Засвоїти принцип і призначення реакції преципітації.
1.2.2. Мета конкретна.
Оволодіти технікою постановки реакції кільцепреципітації і вміти використовувати її результати для діагностики інфекційних хвороб.
1.3. Забезпечення вихідного рівня знань-умінь:
1. Повноцінні та неповноцінні антигени (гаптени, напівгаптени).
2. Корпускулярні та розчинні антигени.
3. Принцип взаємодії антигенів та антитіл.
1.3. Тести на вихідний рівень знань-умінь:
1.3.1. Вкажіть основні ознаки та властивості повноцінного антигена:
A – білок
B – вуглеводи
C – є низькомолекулярною сполукою
D – не розчиняється в рідинах організму
E – викликає утворення антитіл в організмі
F – не здатний вступити в реакцію із специфічними антитілами
G – розчиняється в рідинах організму
H – має колоїдну структуру
Правильна відповідь: A, E, G, H
1.4. Зміст заняття.
Реакція преципітації (РП) являє собою специфічну взаємодію антигену (преципітиногену) і антитіла (преципітину) в присутності електроліту з утворенням осаду. Преципітиногени знаходяться в дисперсному колоїдному стані РП використовують для діагностики інфекційних захворювань (сибірка, туляремія та інші), в судово-медичної експертизі для визначення видової приналежності білків (кров, сперма) та в санітарії для визначення фальсифікації харчових продуктів. РП високо специфічна і чутлива. Преципітиногеном можуть бути білки тваринного, рослинного і мікробного походження, фільтрати культур бактерій чи тканин, інфікованих ними. РП ставлять в різних модифікаціях: кільце преципітації, в гелі. Для найбільш тонких імунологічних досліджень використовують імуноелектрофорез, заснований на розділені антигену в електричному полі, потім проявляють його антисироваткою.
1.4.1. Граф логічної структури змісту.
Граф логічної структури РП кільцепреципітації.
Матеріал для дослідження: колоїдний розчинний антиген з патологічного матеріалу РП ставиться в вузьких пробірках з специфічною преципітуючою сироваткою шляхом нашаровування.
Кінцева відповідь через 1-2 хв.
1.4.2. Перелік теоретичних питань:
1. Гаптени, їх властивості.
2. Характеристика преципітиногенів та преципітинів.
3. Механізм взаємодії преципітиногенів та преципітинів, їх одержання та використання.
4. Методичні варіанти РП: кільцепреципітації, РП в гелі, імуноелектрофорез (РІЕФ).
5. Практичне використання РП в медицині та біології.
1.4.3. Джерела навчальної інформації.
Основна література:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1992, с.177-178
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.197-200
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.220-221
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петергбург, 2002, с.232-233
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.114-115
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.137-141
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.112-118
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973, с.102-106
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и диагностике инфекционных болезней, 1986, с.31-32
Додаткова література:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф. Палій Г.К., 2004, с.107
1.5. Орієнтовна основа дії (ООД)
Використання РП в діагностиці інфекційних хвороб, санітарії, судмедекспертизі:
-
Досліджуваний матеріал
-
Екстракт із збудників, витяжка з інфікованих органів, стенно-мозкова рідина хворих, змив кров’яних плям, харчові продукти
Культури збудників, продукуючих екзотоксин
-
РП преципітації з специфічними сироватками
РП в гелі, імуноелекрофорез
Кінцевий результат Кінцевий результат
через 5-10 хв. через 18-20 год.
1.6. Система навчальних завдань.
1.6.1. Вкажіть основні властивості та ознаки преципітиногену:
A – є гаптен
B – є мікробною клітиною
C – є повноцінним антигеном
D – є екзотоксином
E – є екстрактом бактерій
Правильна відповідь: A, D, E
1.7. Короткі методичні вказівки для роботи студентів на лабораторному занятті.
1.7.1. Методика проведення заняття.
Реакція преципітації (РП) високо специфічна та чутлива. Використовують для виявлення антигенів в досліджуваному матеріалі. РП використовують в мікробіології, санітарії та гігієні, судової медицини для виявлення антигенів в досліджуваному матеріалі. В мікробіології РП найбільш часто проводять з розчинами антигенів, екстрагованими з патологічного матеріалу, чистих культур бактерій. В дослідах використовують діагностичні преципітуючі сироватки. Варіанти постановки РП: кільцепреципітації, в гелі, імуноелектрофорез (ІЕФ).
При постановці РП кільцепреципітації використовують діагностичну преципітуючу сироватку, до якої додають преципітиноген шляхом нашарування. Враховують після 1-2 хв. Позитивний результат виражається в появі преципітата у вигляді білого кільця на кардані сироватки та досліджуваного матеріалу.
РП в гелі ставлять використовують лунки в агарі: в центральну вносять діагностичну сироватку, в периферійні – досліджуваний матеріал. Позитивний результат проявляється у вигляді тонких ліній помутніння.
Імуноелектрофорез проводиться в 2 етапи: І – електрофорез розділення досліджуваного матеріалу; ІІ – імунологічний аналіз. Імунологічну сироватку вносять в „траншеї”, вирізані в агарі, в лунки – досліджуваний матеріал. У випадку позитивної реакції між антигенами та антитілами, які дифундують в агар, формується преципітат у вигляді тонких ліній помутніння.
Порядок виконання лабораторної роботи:
1. Поставити реакцію кільцепреципітації для виявлення термопреципітиногену збудника в досліджуваному матеріалі за допомогою відомої діагностичної сироватки.
2. Познайомитись з методикою постановки та результатами РП в гелі в демонстраційному досліді.
Автор: асистент, кандидат медичних наук Коваленко І.М.