Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Metod_med_2k_Ukr.doc
Скачиваний:
27
Добавлен:
11.03.2016
Размер:
1.45 Mб
Скачать

Методична розробка по підготовці та роботі на лабораторному занятті №16 для студентів медичного факультету.

Тема: Набутий імунітет. Антигени та антитіла. Серологічні реакції. Реакція аглютинації.

    1. Актуальність теми.

Обумовлена широким використанням реакції аглютинації в діагностиці інфекційних захворювань.

1.2. Цілі вивчення теми.

1.2.1. Мета загальна.

Зрозуміти біологічну сутність імунітету як механізму, що підтримує антигенний статус організму.

1.2.2. Мета конкретна.

Студент повинен вміти ставити і оцінювати результати орієнтовної та розгорнутої реакції аглютинації.

1.3. Забезпечення вихідного рівня знань-умінь:

1. Імунна система.

2. Неспецифічні і специфічні фактори резистентності організму.

3. Механізми імунітету.

1.3. Тести на вихідний рівень знань-умінь:

1.3.1. Які органи імунної системи відносяться до центральних:

A – тимус

B – кістковий мозок

C – селезінка

D – лімфатичні вузли

E – печінка

Правильна відповідь А, В

1.4. Зміст заняття.

Реакція аглютинації (РА) є імунологічною, яка проявляється в склеюванні та випадінні в осад корпускулярних антигенів (бактерії, еритроцити). Характер та швидкість проходження РА залежить від антигенної будови бактерій. Дрібнозернисту О- аглютинацію дають бактерії, які не мають джгутиків. При наявності джгутиків (Н- аглютинація) проявляється в утворенні крупнохлопчатого осаду. РА достатньо специфічна і чутлива. Вона широко використовується в практиці серологічної діагностики інфекційних хвороб для ідентифікації виявленого збудника з використанням відомих стандартних видових, типових аглютинуючих сироваток, а також для виявлення в сироватці хворих аглютининів з допомогою відомих бактерій (діагностикумів).

В практиці діагностики інфекційних хвороб використовують непряму (пасивну) гемаглютинацію-РНГА (РПГА), яка полягає в використанні еритроцитів, на поверхні яких адсорбується антиген.

1.4.1. Граф логічної структури змісту.

Використання РА в діагностиці інфекційних хвороб:

1. Ідентифікація збудника.

Досліджуваний матеріал – виділена чиста культура бактерій.

Постановка РА бактерій на склі з специфічними аглютинуючими видовими та типовими сироватками.

Кінцевий результат через 10-15 хв.

2. Визначення титру антитіл в сироватці хворого.

Досліджуваний матеріал – сироватка крові хворого.

Постановка розгорнутої РА з сироваткою хворого в розведенні 1:50-1:1600 з специфічними діагностикумами.

Кінцевий результат через 18-20 год.

1.4.2. Перелік теоретичних питань:

1. Визначення поняття „імунітет”.

2. Антигени, загальна характеристика, детермінантні групи.

3. Антигенна структура бактеріальної клітини.

4. Антитіла, загальна характеристика, хімічна природа.

5. Класи імуноглобулінів.

6. Серологічні реакції та феномени, які лежать в їх основі.

7. Аглютиногени, аглютинини, діагностикуми, їх отримання і використання.

8. Імунні сироватки, їх отримання, призначення.

9. Реакції аглютинації орієнтовна та розгорнута, механізм взаємодії інгредієнтів.

10. Реакція пасивної гемаглютинації (РПГА), її механізм.

11. Методичні варіанти, техніка здійснення, діагностичне застосування реакції аглютинації (РА) та реакції пасивної гемаглютинації (РПГА).

1.4.3. Джерела навчальної інформації.

Основна література:

К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1982, с.145-157, 172-177

К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.169-181, 195-197

В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.180-184, 188-192, 218-222

А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, Санкт-Петергбург, 2002, с.151-161, 163-171, 176-181, 229-232

О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.126-136

И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стогний. Микробиология, Харьков, 1999, с.85-86, 89-93, 94-96, 112-114

Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.107-112

М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицин ской микробиологии, М., 1973, с.136-143

Додаткова література:

Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф. Палій, К., 2004.

1.5. Орієнтовна основа дії (ООД)

Використання РА в діагностиці інфекційних хвороб:

Досліджуваний матеріал

Чиста культура збудника

Сироватка крові хворого

РА на склі з специфічними видовими, типовими, аглютинуючими сироватками

Розгорнута РА з розведеннями сироватки хворого та специфічними діагностикумами

Кінцевий результат Кінцевий результат

через 10-15 хв. через 18-20 год.

1.6. Система навчальних завдань.

1.6.1. Вкажіть компоненти, які необхідні для постановки розгорнутої реакції аглютинації:

A – сироватки крові хворого

B – фізіологічний розчин

C – чиста культура бактерій

D – відома імунна неадсорбована сироватка

E – завись еритроцитів

F – діагностикум

G – комплемент

Правильна відповідь А, В, F

1.7. Методичні вказівки для роботи студентів на лабораторному занятті.

1.7.1. Методика проведення заняття.

Реакція аглютинації (РА) широко використовується в лабораторній діагностиці інфекційних захворювань. Її використовують як для ідентифікації збудника з допомогою діагностичних аглютинуючих сироваток, так і для визначення антитіл в сироватці крові хворого по відомим антигенам (діагностикумам).

З метою ідентифікації бактерій ставлять орієнтовну РА на склі. Для цього в краплю діагностичної аглютинуючої сироватки петлею вносять виділену культуру і перемішуємо. Супроводжується РА контролем – в краплю фізрозчину додають виділену бактеріальну культуру. Спостерігають за появою зерен аглютинату в досліді, в контролі – помутніння.

Для виявлення антитіл в сироватці хворого до її розведень (1:50-1:1600) додають відомий діагностикум і вміщують в термостат (37оС) на 18-24 години. Потім визначають титр антитіл по появі зерен або пластівців аглютинату в розведеннях сироватки, в контролі діагностикуму – рівномірне помутніння, в контролі сироватки – рідина прозора.

Найбільш специфічна і чутлива реакція пасивної гемаглютинації (РПГА) широко використовується для виявлення специфічних антитіл в сироватці крові хворого при вірусних та інших інфекційних захворюваннях. Для цього використовують стандартний еритроцитарний діагностикум, який додають до розведень сироватки хворого в лунки планшету. Інкубують в термостаті (37оС) проводять первинний облік через 2 години, кінцевий – через 18-20 годин. Позитивна РПГА виражається в появі на дні лунок крихкого осаду у вигляді парасольки, негативна – осад в вигляді компактного диску з рівними краями.

Порядок проведення лабораторної роботи:

1. Поставити та врахувати орієнтовну реакцію аглютинації на склі з метою ідентифікації виділеної культури бактерій.

2. Врахувати розгорнуту реакцію аглютинації з метою серологічної діагностики інфекційного захворювання.

3. Врахувати РПГА в демонстраційному досліді.

4. Ознайомитися з біопрепаратами для РА та РПГА.

Автор: асистент, кандидат медичних наук Коваленко І.М.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]