2 Этап. Обработка этанолом (дифференциация)

одни микробы другие микробы

сохраняют комплекс генциановый теряют комплекс генциановый

фиолетовый+йод, не обесцвечиваются фиолетовый+йод, обесцвечиваются. это связано с тем, что: объясняется тем, что:

-клеточная стенка толстая, -клеточная стенка микробов тонкая,

-в ее состав входит много пеп- -пептидогликана мало,

тидогликана,

-имеются тейхоевые кислоты - тейхоевых кислот нет

- по строению клеточная стенка - структура клеточной стенки

представляет собой прочное мозаичная, рыхлая, поэтому

образование, поэтому после обра- после обработки этанолом поры

ботки этанолом поры клеточной остаются прежними, краска

стенки суживаются и краска не - вымывается, микробы обесцве-

вымывается. чиваются

3 Этап. Окраска фуксином

одни микробы другие микробы

остаются сине-фиолетовыми, окрашиваются в красный цвет,

грамположительные: грамотрицательные:

1.Все кокки за исключением 1.Гонококки и менингококки

гонококков и менингококков

2.Все спорообразующие палочки 2.Большинство неспорообразующих

палочек

3.Из неспорообразующих бактерий 3.Спириллы

туберкулезная и дифтерийная палочки

4.Актиномицеты 4.Риккетсии

5.Грибы 5.Микоплазмы

Окраска по методу Грама не используется при изучении спирохет, простейших и вирусов.

Сущность метода окраски по Граму: отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового и йода. У грамположительных бактерий основным веществом клеточной стенки (до 90%) являются мукопептиды-муреин (пептидогликан). У грамотрицательных бактерий однослойный муреин располагается в глубине клеточной стенки, значительно больше содержится белков и липидов, которые вместе с полисахаридами образуют поверхностные слои в виде мозаики, их цитоплазма содержит РНК и ДНК в соотношении 8:1 и 1:1 соответственно. Кроме того, проницаемость клеточной стенки у грамположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Это объясняется большим содержанием мукопептида в составе клеточной стенки грамположительных бактерий и меньшим диаметром пор, что способствует удержанию образовавшегося комплекса при обработке бактерий этиловым спиртом.

Методика окраски по методу Романовского-Гимзы:

Краска Романовского-Гимзы состоит из метиленового синего, эозина и азура.

1. На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 м дистиллированной воды) на 10-20 мин.

2. Препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый цвет, боррелии - в фиолетовый цвет, лептоспиры - в розовый цвет. Сапрофитные (непатогенные) формы окрашиваются в синий цвет. Морфологию спирохет изучают также в живом состоянии в фазово-контрастном или темнопольном микроскопе. Хорошим методом выявления спирохет является серебрение по Морозову.

Методика окраски по методу Циля- Нильсена:

1. На фиксированный препарат – мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в течении 3-5 мин;

2. Снять бумагу, промыть мазок водой;

3. Нанести 5% раствор серной кислоты или 3% раствор смеси спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин до обесцвечивания;

4. Промыть водой;

5. Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течении 3-5 мин;

6. Промыть водой, высушить, микроскопировать.

Методика окраски по методу Ожешко:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлороводородной кислоты и подогреть на пламени в течении 2-3 мин.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену. Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы- синий.