- •27) Применение ферментов в лабораторной диагностике
- •28)Количественное определение каталазы
- •29)Определение амилазы мочи по Вольгемуту
- •30)История учения о биологическом окислении
- •31)Современные представления о биологическом окислении
- •32)Основная роль бо.Схема образования субстратов.
- •33)Этапы бо
- •34)Строение атф,значение
- •35)Строение и ф-ции митохондрий
- •36)Цтк как конечный путь использования субстратов
- •37)Значение и регуляция цтк
- •1. Энергетическая функция.
- •2. Пластическая функция.
- •3. Регуляторная.
- •38)Ферменты тканевого дыхания
- •39)Витамин рр
- •40)Витамин в2
- •42)Механизм сопряжения оф
- •43)Теория Митчелла,м-м генерации протонного потенциала
- •44)Разобщение окисления и фосфорилирования.
- •45) Особенности митохондр окисл в бур жир тк
- •46) Значение митохондр окисления
- •47)Микросомальная цепь переноса электронов
- •48)Значение микросомального окисления
- •49)Сходство и различия микросомального и митохондриального окислений
- •50)Образование активных форм кислорода
- •51)Антиоксиданты
- •52)Витамин с
27) Применение ферментов в лабораторной диагностике
Медицинская энзимология - раздел клинической биохимии, который занимается изучением роли ферментов в заболеваниях, использование ферментов как лечебных препаратов и для диагностики.
Имеет 5 направлений:
1. Энзимопатология. (Изучение роли ферментов в развитие патологических процессов). Объект - изучения энзимопатиия.
2. Энзимодиагностика. (Изучение способов диагностики заболеваний путем определения активности ферментов).
3. Энзимотерапия. (Использование ферментов в качестве леарственных препаратов).
4. Инженерная энзимология. ( Использование ферментов в качестве технических и фармацевтических средств, в качестве реагентов).
5. Лабораторная диагностика. (Выделение ферментов в малых количествах).
28)Количественное определение каталазы
Количественное определение каталазы по Баху и Зубковой.
ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на титриметрическом определении количества перекиси водорода, разложенной ферментом за определенный промежуток времени, по следующему уравнению:
2KMnO4 + 5H2O2 + 4H2SO4 2KHSO4 + 2MnSO4 + 8H2O + 5O2
О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества KMnO4, израсходованного на титрование до и после действия каталазы.
Активность каталазы выражают с помощью каталазного числа и показателя каталазы. Каталазным числом называют количество мг перекиси водорода, которое разлагается в 1 мкл крови
Клинико-диагностическое значение
Определение активности каталазы крови имеет значение для диагностики рака, анемии, туберкулеза. При этих заболеваниях активность каталазы в крови снижается.
ПРИМЕЧАНИЕ: Показателем каталазы служит дробь, в которой числителем является каталазное число, а знаменателем - число миллионов эритроцитов в 1 мкл исследуемой крови.
29)Определение амилазы мочи по Вольгемуту
ПРИНЦИП МЕТОДА: Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, ликвор, слюна, сыворотка крови) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством мл крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45ºC за 15 минут.
Клинико-диагностическое значение.
Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.
30)История учения о биологическом окислении
В XVII - XVIII вв широкое признание получила теория горючего начала - флогистона, сформулированная Штаммом. Эта теория объясняла процессы горения выделениями их горящего тела особого невесомого в-ва, и была опровергнута Ломоносовым и Лавуазье, которые открыли закон сохранения энергии.
В середине XVIII века было установлено:
1) процесс горения идет в воздушной среде с высокой температурой, дыхание - в среде с пониженной температурой;
2) при дыхании, как и при горении выделяется тепло, но в незначительных количествах;
3) конечные продукты CO2 и H2O.
В 1751 году Ломоносов подробно рассмотрел процессы горения и окисления.
В 1774 году Лавуазье повторил опыты Ломоосова и показал, что процессы горения и дыхания идентичны, т. к. образуются идентичные продукты.
Лавуазье назвал дыхание медленным горением и показал процесс сгорания Гл в организме:
C6H12O6 + 6O2 ------> 6CO2 + 6H2O + Q
В начале XIX века стали известными катализаторы, с помощью которых осуществлялись процессы окисления. Это были металлы, обладающие «внутренней силой».
В середине XIX века немецкий ученый Шейнбайн, открывший озон, предположил, что в организме образуется озон и он используется в реакциях окисления.
После работ Лавуазье в науке господствовало мнение о тождестве горения и медленного окисления питательных вкществ в организме. Вместе с тем было ясно, что БО протекает в необычных условиях:
- при пониженной температуре;
- без пламени;
- и в присутсвии большого количества H2O (75% - 80% ткани).
В XIX веке появилось понятие о ферментах и причину своеобразного течения БО попытались объяснить «активацией» кислорода в клетках организма.
Одна из теорий была выдвинута Бахом, который считал, что «активация» молекулярного кислорода происходит в результате разрыва связи и присоединения к ферментам оксигеназам (А), способным к аутооксидации:
O A + O2 -----> A |
O перекись
O
A | + SH2 -----> S + A + H2O2 O субстарат
3 положения Баха:
1. Наличие высокоактивной оксидазы, но это не было обнаружено.
2.В тканях должна быть высокая концентрация H2O2, но это тоже не было обнаружено.
3. Высокая активность ферментов, разлагающих H2O2; это было обнаружено, существует 2 фермента:
каталаза
2H2O2 ------------> 2H2O + O2
Существует и другой механизм разложения H2O2:
2GSH + H2O2 -----> 2H2O (пероксидаза) или глутатион |
SH2 + H2O2 -----> S + 2H2O ---
Эта теория да и все остальные основывались на неправильном представлении об ОВР. Окислительный процесс рассматривался как процесс взаимодействия любого вещества с кислородом. То есть кислород - это окислитеоь.
К концу XIX века с разхвитием физики ядра и накопления знаний о структуре вещества, было установлено, что не все процессы окисления требуют для своей реализации наличие кислорода.
Кроме этого теория Баха основывалась на том, что в организме имеется большое количество ароматических соединений, на самом же деле их очень мало, в оновном глюкоза.
Согласно современных представлений ОВР - это процесс перемещения электронов и протонов от донора (восстановителя) - это процесс окисления - к акцептору (окислителю) - процесс восстановления.
Количественной мерой ОВР является величина ОВП. В начале точки отсчета стандартного потенциала взят ОВП водорода.
В 1912 году была сформулирована теория Палладина-Виланда, согласно которой в организме есть промежуточные вещества, способные акцептировать электроны и протоны от субстрата с последующей передачей электронов и протонов на кислород, по этой теории весь процесс БО можно разбить на 2 этапа:
1) анаэробный - передача электронов и протонов с субстрата на промежуточное вещество;
2) аэробный - передача электронов и протонов с промежуточного вещества на кислород.
Палладин предпологал, что существует несколько промежуточных переносчиков, позволяющих организму поэтапно освобождать химическую энергию и кислород выступает в качестве конечного акцептора электронов и протонов.
1 анаэробный этап:
SH2 + ----> S +
2 аэробный этап:
½ O2 -----> + H2O
Роль промежуточных переносчиков (хромогенов) выполняют коферменты (НАД; НАДФ; ФАД; ФМН) оксидоредуктаз.