Характеристики

Саузерн

Нозерн

Вестерн

Что

разделяется

в

ДНК

разрезается Денатурация

РНК Денатурация

ДНК

зависимости

от

рестриктазами

формальдегидом

додецилсульфатом

натрия

молекулярной

массы?

(SDS)

(мишень)

Зонд

Радиоактивный ген

Х Радиоактивный

ген Х Антитело к белку

Х с

(ДНК)

(ДНК)

радиоактивной

или

ферментной меткой

Какую дает информацию?

Рестрикционная карта гена

-количество

имеющейся

-количество имеющегося

Х в хромосоме

мРНК гена Х

белка Х

-длина мРНК гена Х

-величина молекулы белка

Х

Саузерн-блот

Нозерн-блот

Вестерн-блот

1.Экстракция ДНК из клеток

1.Экстракция из клеток РНК

1.Экстракция из клеток белка

1.Разрезание молекулы рестриктазами

1.Денатурация формальдегидом

1.Денатурация

додецилсульфатом

натрия

1.Разделение в геле (обычно агарозном)

1.Разделение в геле (обычно агарозном)

1.Разделение

в

геле (обычно

полиакриламидном)

1.Денатурация ДНК щелочью

1.Перенос на

нитроцеллюлозу

(обычно

1.Перенос

на

нитроцеллюлозу

посредством капиллярности)

(обычно,

посредством

электрофореза)

1.Перенос на нитроцеллюлозу (обычно,

1.Блокирование избытком РНК

1.Блокирование избытком белка

посредством капиллярности)

1.Блокирование избытком ДНК

1.Гибридизация меченым ДНК-зондом

1.Гибридизация с меченым зондом-

антителом

1.Гибридизация с меченым ДНК-зондом

1.Вымывание

несвязанного

зонда

1.Вымывание

несвязанного зонда

(использование

«контролируемой

(использование

«контролируемой

строгости»)

строгости»)

1.Вымывание

несвязанного

зонда

1.Ауторадиография

1.Ауторадиография

или

(использование

«контролируемой

превращение

хромогенного

строгости»

субстрата