- •СПбГавм
- •Методы диагностики
- •Дифференциация патогенных стафилококков от непатогенных
- •Методы диагностики:
- •Синегнойная палочка
- •Методы диагностики:
- •Методы диагностики:
- •Дифференциация b.Anthracis и непатогенных почвенных бацилл-антракоидов b.Cereus, b.Subtilis, b.Mycoides и др.)
- •Дифференциация возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis и возбудителя эмфизематозного карбункула (эмкара) Clostridium chauvoei
- •Пастереллёз
- •Методы диагностики:
- •Возбудитель рожи свиней
- •Методы диагностики:
- •Возбудитель листериоза
- •Дифференциация возбудителей листериоза и рожи свиней
- •Сальмонеллёз
- •Методы диагностики:
- •Колибактериоз
- •Туберкулез
- •Паратуберкулез
- •Методы диагностики
- •Возбудители анаэробных инфекций
- •Методы диагностики
- •Материал для исследования:
- •Культивирование:
- •Культурально-морфологические свойства анаэробов
- •Биопрепараты при анаэробных инфекциях
- •Лептоспироз
- •Методы диагностики
- •Кампилобактериоз (вибриоз)
- •Методы диагностики.
Методы диагностики
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Материал для исследования: аборт.плод с оболочками, желудок плода, печень, почки плода, молоко, содержимое гигром. От убитых животных – лимфоузлы, матка, яичники, вымя, семенники и др.
Микроскопия: Методы окраски: по Граму(-), а мазки из патматериала - поКозловскому (красные на зелёном фоне)(Bruc. труднее окрашиваются и хуже отдают воспринятый ими цвет, чем сопутствующая м/ф.); бруцеллы - очень мелкиекоккобактерии(0,3-0,6 мкм) располаг. одиночно, парами и небольшими группами);спор не образуют, имеется небольшая капсула (не имеет диагност.значения); неподвижны.
Культивирование: Бруцеллы плохо растут на простых средах; посев производят на специальные питательные среды – мясо-пептонный печеночный бульон(МППБ),мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар(МППГГА), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар(МГГБ и МГГА) с 10%-ной глюкозой и 2-3% - ным глицерином,эритрит-агар. Также эффективен посев по 0,2 мл иссл. материала вжелточный мешоксвежих, неоплодотворённых куриных яиц. После инкубации 5 суток при 37оС яйца вскрывают, набирают пастеровскими пипетками желток и пересевают на плотные и жидкие питат. среды. оптимальнаяt37oС; срок - от 15 до 30 дн.
Культуральные свойства:На жидких средах – равномерное помутнение, пристеноч. кольцо, незначит. осадок. На плотных средах – росинчатые. мелкие,выпуклые, прозрачные с ровным краем колонии с голубовато-серым или янтарным оттенком.S-форма, но может быть иR-ф.
Биохимические свойства: Сахаролитические свойства выражены слабо; молоко бруцеллы не свертывают, желатин не разжижают, образуют каталазу.Для дифференциации видов бруцеллпо культуральным и биохим. свойствам используют тесты:
бруцеллы Br.bovis, Br.ovis - микроаэрофилы; их выращивают в атмосфере 10-15% СО2; остальные виды бруцелл – аэробы;
сероводород образуют Br. suis в меньшей степени Br. abortus.
виды бруцелл различаются по способности проявлять оксидазную активность, расти в среде, содержащей тионини основнойфуксин
При получении культуры, адаптированной к среде, проводят ее типизацию сыворотками. Однако предварительно проверяют культуру на наличие диссоциации. Ставят РА на предметном стекле: трипафлавин + смыв с 48 часовой агаровой культуры. В норме агглютинации не должно быть.
Часто при бак. диагностике выделяют вакцинные штаммы, которые надо
дифференцировать от патогенных. Вакцинный штамм №19 чувствителен к ихтиолу и пенициллину. Поэтому к средам добавляют эти препараты.
Полевые штаммы растут на этих средах, а вакцинный – нет.
СЕРОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
1. РАс позитивной моноспецифич. сывороткой для идентификации получ. культуры.
2.РАс единым бруцеллёзным антигеном, для исследования сыворотки крови животных (считается положительной, если идет на 2 ++ и > с разведением сыворотки 1:100 для крупных животных и 1: 50 для мелких животных.
3. РСК(самая чувствительная) – для стад с давней инфекцией;
4. РДСК–ещё более чувствительная, чем РСК–для диагностики эпидидимита баранов.
5. РБП– ориентировочная для всех с/х животных на фермах;
6. КР с молокомна фермах и на рынках;
7. МФА (РИФ) – экспресс-диагностика пат.материала
При постановке диагноза на Bruc. его надо дифференцировать от туляремии и иерсиниоза, так как у этих возбудителей имеются общие антигены.
БИОПРОБА: заражают подкожно морских свинок, белых мышей.
Морской свинке п/к вводят пат. материал или выделенную чистую культуру. Наблюдение 2 мес. Контроль биопробы – постановка РА, которую ставят на 15, 25 сут. с сывороткой крови зараженного животного. Если титр увеличивается до1:10 биопроба считается положительной.
АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОДдля аллергической диагностики бруцеллёза овец, коз, свиней животным вводят бруцеллин ВИЭВ.
БИОПРЕПАРАТЫ.
Диагностические - см. серологические исследования. Иммунитет при Bruc. вначале нестерильный, формируется медленно. Роль антител – неэффективна. Для профилактики применяются:
1.живая вакцина из штамма 19 B.abortus.
2.вакцина из слабоагглютиногенного штамма 82 Bruc.abortus,против бруцеллёза КРС.
3.живая вакцина из штамма Рев-1 Bruc.melitensis.
4.инактивиров. адъювант-вакцина из штамма B.abortusКВ 17/100 для КРС
ООИ ТУЛЯРЕМИЯ
Природно-очаговая инфекционная болезнь, характеризуется лихорадкой, увеличением лимфатических узлов (бубоны).У с/х животных обычно проявляется в септической форме. Проявляется симптомами поражениея ЦНС, параличами, у КРС - маститами, у лошадей - абортами. Наиболее чувствительны зайцы (заячья чума), полёвки, хомяки, домовые мыши. Спорадически заболевают поросята, ягнята, лошади. КРС, пушные звери. Восприимчивы люди. Переносчики – грызуны, клещи, комары, москиты.
Возбудитель: Род Francisella.
Вид Francisella tularensis.
Биовары:
Francisellatularensissb.tularensis
Francisellatularensissb.paraearctica
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД Может быть применён только в специализированной противочумной лаборатории!
Материал для исследования. печень, почки, лимфатические узлы, трупы грызунов. Желательно транспортировать в замороженном виде или в 30%-м глицерине.
Морфология.Францизеллы – полиморфные, очень мелкие коккоподобные палочки. В мазках из жидких культур – изогнутые палочки, иногда нити. Часто образуются фильтрующиесяL-формы (не видны под микроскопом и проходят через бак. фильтры). Гр. -, но по Граму окрашиваются плохо.По Романовскому-Гимзе– красновато-фиолетового цвета, иногда – биполярны. Неподвижны, Сп-, есть небольшая капсула.
Культивирование.
Строгий аэроб.На простых питательных средах не растет!Культивируют на спец. средах: желточных, содержащих цистин. Практикуется также посев материала вжелточный мешокразвивающихся 12-дневных куриных эмбрионов – как в среду накопления.
Культуральные свойства. На средеФренсиса (с цистином, глюкозой и дефибринизированной кровью кролика) – образует беловатые, гладкие, блестящие колонии 1-2 мм с ровными краями или молочно-белый налёт. Вокруг колоний – характерная зеленоватая зона гемолиза. На желточной средеМак-Кояобразует нежный, сочный извилистый налёт – «шагреневая кожа»). Колонии – слизистой консистенции. На полужидкой желточной средеДрожевкиной– слизистая плёнка.
Биохимические свойстваизучить очень трудно, так как возбудитель растёт только на специальных средах. В научных целях применяют специальные плотные среды с сахарами: на них францизеллы образуют кислоту из мальтозы, сахарозы, глицерина. Выделяют сероводород, редуцируют тионин, метиленовый голубой, малахит. зелёный.
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Заражают белых мышей и морских свинок п/к, внутрибрюшинно или путем скарификации кожина животе и втирания материала.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
РАпробирочная и кровекапельная, с сывороткой крови больных. Антиген для этой реакции - тулярийный диагностикум (францизеллы, убитые формалином).
МФА (прямой и непрямой метод) – очень хороший экспресс-метод диагностики.
РП(по Асколи) – для исследования разложившихся трупов грызунов.
(Также применяют РНГА (реакция непрямой гемагглютинации), РН (Реакция нейтрализации антител), ИФА- ( метод ELISA))
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ МЕТОД - . ПЦР.
АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД– в/кожно людям вводят в предплечье тулярин – взвесь микробов, инактивированных при 70оС. Р-ю учитыва-ют ч/з 24-48 час.
БИОПРЕПАРАТОВ И ВАКЦИНДЛЯ ЖИВОТНЫХ НЕТДля людей – есть сухая живая вакцина против туляремии и лечебная сыворотка.
С профилактической целью применяют дератизацию.