Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Экстрагирование.doc
Скачиваний:
337
Добавлен:
02.05.2015
Размер:
435.2 Кб
Скачать

Технология препаратов для парентерального введения

Особое внимание в технологии этой группы препаратов уделяется очистке от балластных примесей. Особенности рассмотрены на примере инсулина.

Инсулин (Insulinum) – гормон поджелудочной железы, который вырабатывается бетта-клетками островков Лангерганса. Химическая природа его – белок. Молекула инсулина человека состоит из двух полипептидных цепей – А и В, соединенных двумя дисульфидными связями. А-цепь содержит 21, а В-цепь – 30 аминокислотных остатков. М.м. инсулина 58 тыс.

Получение инсулина состоит из следующих стадий:

  1. Измельчение замороженных поджелудочных желез и экстракция кислым спиртовым раствором.

  2. Осаждение балластных белков 9рН 7,5) и освобождение от липидов.

  3. Изоэлектрическое осаждение фракции инсулина (при рН 5,5) и осаждение спиртом, ацетоном, эфиром.

  4. Очистка инсулина: осаждение солями, фракционирование методами хроматографии, гель-фильтрации и др.

  5. Осаждение инсулина в виде кристаллов.

  6. Переосаждение цинк-инсулина.

Свежие или замороженные поджелудочные железы измельчают на мясорубке-волчке и экстрагируют способом бисмацерации первый раз 80-85% этанолом в реакторе с мешалкой. Второй раз экстрагируют 57% этанолом, который подкислен ортофосфорной кислотой 9хлороводородной или серной0 до значения рН 2,8-3. Экстракцию проводят 1,5-4 ч при постоянном перемеши-вании. Подкисленный спирт способствует инактивации фермента трипсина, находящегося в поджелудочной железе, благодаря чему удается сохранить инсулин в неизменном состоянии. На Минском заводе эндокринных препаратов используют роторно-пульсационный аппарат для экстракции, что в значи-тельной мере определяет интенсивность экстрагирования инсулина (1,5 ч).

Полученные вытяжки объединяют, оставляют на холоду на 48 ч для освобождения от нежелательных белков, которые выпадают в виде осадка. Осадок отделяют центрифугированием и удаляют. Затем для выделения и очистки инсулина применяют ионообменную хроматографию (наиболее прогрессивный способ очистки). Осуществляют сорбцию инсулина из прозрачной жидкости на макропористом сульфокатионите КУ-33-30/100 при значении рН 3,0-3,3 в режиме псевдоожижения. Жир удаляют путем промывки катионита 65-67% этанолом, при этом балластные белки удаляют промыванием 0,3М раствором ацетатного буфера (рН 5,3).

Десорбцию инсулина осуществляют быстро с помощью 0,01-0,05М раствора аммонийного буфера (при рн10) и немедленно подкисляют кислотой хлороводородной до значения рН 4,5 и добавляют ацетон. Выпавший осадок балластных веществ удаляют. Инсулин осаждают раствором цинка ацетата (при рН 6,2) – получают цинк-инсулин, который очищают кристаллизацией. Цинк-инсулин растворяют в воде, подкисленной кислотой лимонной до значения рН 2,8. Раствор отстаивают 1 ч, выпавший осадок балластных белков удаляют фильтрованием через кизельгур. Фильтрат смешивают с ацетоном, добавляют цинк хлористый и фенол, охлаждают до температуры 00С. Для медленной кристаллизации инсулина создают условия с последовательным постепенным изменением рН раствора.

Раствор подщелачивают до значения рн 8,5; оставляют на 2-3 мин, затем создают значение рН 6,8, перемешивают 1 ч; при значении рН 6,5 перемешивают 2 ч; при значении рН 6,2 и 6,0 перемешивают 2 ч и отстаивают 20 ч; при значении рН 5,8 перемешивают 2ч и отстаивают 48-96 ч при температуре 50С. Выпавшие кристаллы инсулина отделяют центрифугированием, промывают на воронке Бюхнера последовательно холодной водой очищенной, ацетоном, эфиром. Досушивание проводят на воздухе, в вытяжном шкафу и эксикаторе.

Тут вы можете оставить комментарий к выбранному абзацу или сообщить об ошибке.

Оставленные комментарии видны всем.