Глава I. Нормальная и патологиеская физиология эритропоэза.

1. Эритропоэз.

Термином «эритропоэз» обозначается процесс непрерывного клеточного развития от полипотентной стволовой клетки через эритропоэтин-чувствительную клетку и эритробласты до зрелых эритроцитов (рис.1). Вся масса эритропоэтических клеток-предшественников и циркулирующих в крови эритроцитов объединяется понятиемэритрон.

Клетки-предшественники эритроидного ряда обладают очень высокой пролиферативной активностью: за 1 мин вырабатывается 300 млн. эритроцитов, за сутки – количество, равное массе человека, а за всю жизнь вырабатывается 5 тонн эритроцитов.

Непосредственным предшественником эритроцитов является унипотентная стволовая клетка, которая для своей пролиферации и дифференцировки до зрелых эритроцитов нуждается в эритропоэтине, поэтому она называется эритропоэтин-чувствительной стволовой клеткой. Весь путь от эритропоэтин-чувствительной стволовой клетки до зрелого эритроцита составляет 12 дней.

Морфологические особенности эритропоэтин-чувствительных стволовых клеток так же, как и полипотентной стволовой клетки, непостоянны: вне митотического цикла они напоминают лимфоциты, а в пролиферирующем состоянии – бласты.

Существование эритропоэтин-чувствительных стволовых клеток установлено на основании усиления эритропоэза у полицитемических мышей с блокированной продукцией эритроцитов после введения им эритропоэтина.

Первой морфологически различимой эритроидной клеткой является эритробласт(проэритробласт). Ядро эритробласта характеризуется нежной структурой хроматина и наличием нескольких ядрышек. Цитоплазма эритробласта не содержит гемоглобина, однако уже начинает накапливать железо, необходимое для его построения, и окрашивается в насыщенно синий цвет с фиолетовым оттенком вследствие высокой концентрации рибонуклеиновых кислот.

В процессе дальнейшей дифференцировки эритробласт подвергается четырем митотическим делениям и изменяется морфологически: ядро теряет ядрышки, хроматиновая сеть становится более грубой, приобретая колесовидную структуру, а затем еще более уплотняется (пикнотизируеся) и одновременно в связи с появлением гемоглобина изменяется цвет цитоплазмы. Эритроидные клетки в этой стадии развития обозначаются как полихроматофильные эритробласты.

В зависимости от степени гемоглобинизации, определяющей окрашивание цитоплазмы, эритробласты разделяются на базофильные, полихроматофильные и оксифильные. На стадии базофильного эритробласта синтезируется минимальное количество гемоглобина, сосредоточенного, главным образом, в перинуклеарной зоне. На стадии полихроматофильного эритробласта активность синтеза гемоглобина повышается, что обуславливает полихромазию цитоплазмы. Дальнейшее накопление гемоглобина вызывает розовое окрашивание цитоплазмы, характерное для оксифильных или ортохромных эритробластов.

Оксифильный эритробласт, не способный к митотическому делению, теряет ядро и превращается в ретикулоцит, который продолжает синтезировать гемоглобин благодаря сохраняющимся в цитоплазме митохондриям, рибосомам и другим органеллам.

После экспульсии ядра ретикулоцит находится в костном мозге и селезенке еще 30-40 часов, а затем, теряя цитоплазматические включения, поступает в кровоток в виде зрелого эритроцита.

Процесс вызревания эритробластов осуществляется в костномозговых «эритробластных островках», состоящих из одного или двух макрофагов (сидерофагов), содержащих железо и окруженных эритробластами на различных стадиях созревания. Через сидерофаги эритробластных островков в эритропоэтические клетки поступают вещества, необходимые для синтеза гемоглобина и клеточного вызревания.

Регуляция пролиферации и дифференциации эритропоэтических клеток-предшественников осуществляется в основном дистанционно: гликопротеиновым гормоном – эритропоэтином.

Основным местом синтеза эритропоэтического фактора (ЭПФ) – предшественника эритропоэтина, являются почки (висцеральные клетки клубочковых футляров). Регулятором продукции ЭПФ служит напряжение кислорода в тканях. При развитии гипоксии в почках увеличивается синтез ЭПФ, не обладающего непосредственной эритропоэтической активностью. Одновременно в печени усиливается синтез глобулина-эритропоэтиногена. В результате взаимодействия этих двух факторов в крови происходит выработка активного эритропоэтина, стимулирующего усиление эритропоэза и увеличение массы циркулирующих эритроцитов. Обратные процессы наблюдаются при прекращении состояния гипоксии. Помимо стимулирующего влияния на стволовую клетку красного ряда эритропоэтин действует и на морфологически различимые эритропоэтические клетки, ускоряя их дифференцировку и повышая активность синтеза гема и накопления гемоглобина.

Предполагается, что в регуляции эритропоэза принимают участие андрогены, глюкокортикоиды, гормоны щитовидной железы и тимуса.

2. Гемоглобин.

Гемоглобин (Hb) представляет собой дыхательный белок, главная функция которого состоит в переносе кислорода от легких к тканям. Биосинтез гемоглобина происходит в эритробластах в процессе их созревания (80%) и в ретикулоцитах (20%).

По химической структуре гемоглобин относится к группе гемопротеидов, имеющих в своем составе белок-глобин и железосодержащую простетическую группу – гем, составляющую 4% массы молекулы.

Гем – это протопорфириновое кольцо с поливалентным атомом железа в центре. Гем одинаков для всех видов животных.

Белковая часть гемоглобина – глобин, состоит из двух пар полипептидных цепей. Полипептидные цепи, входящие в состав глобина, имеют различный состав, соотношение и расположение аминокислот, что определяет неоднородность биологических и физико-химических свойств, характерных для той или иной физиологической или патологической разновидности гемоглобина. Гемоглобин здоровых людей включает HbA(95-98%Hbкрови), состоящий из двух α- и двух β-цепей иHbF(0,1-2%) – из двух α- и двух γ-цепей.

Каждая полипептидная цепь соединена с гемом, который располагается в ее гидрофобной впадине, недалеко от поверхности. Фиксация гема осуществляется за счет неполярных контактов гема с цепью глобина.

Расположение гема в гидрофобной области глобина обуславливает возможность обратимого присоединения кислорода к гемоглобину без окисления последнего, что свойственно всем дыхательным пигментам у млекопитающих, беспозвоночных и червей.

Каждый грамм гемоглобина способен связывать 1,34 мл кислорода. Каждые 100 мл артериальной крови переносят 19 мл кислорода, связанного с гемоглобином, и 0,3 мл кислорода, растворенного в плазме.

В легких в условиях высокого парциального давления кислорода (100 mmHg) гемоглобин, соединяясь с кислородом, образует оксигемоглобин (HbO₂). При прохождении крови по тканям, где существует низкое давление кислорода (40mmHg), происходит диссоциация оксигемоглобина на гемоглобин и кислород. Большое влияние на способность гемоглобина связывать кислород оказываетpHсреды. ИзменениеpHв кислую сторону при повышении содержания в крови углекислоты и других кислот (уксусная, молочная) уменьшает сродство гемоглобина к кислороду и способствует диссоциацииHbO₂, а сдвигpHв щелочную сторону оказывает противоположное действие.

Помимо кислорода гемоглобин способен связывать углекислоту (СО₂), образуя карбоксигемоглобин (HbСO₂). С помощью этого механизма до 15% СO₂выводится из организма. При незначительном повышении в воздухе угарного газа – окисиуглерода (СО) гемоглобин образует карбоксигемоглобин, медленно диссоциирующееся соединение.

При отравлении некоторыми лекарственными веществами (фенацетином, антипирином, амилнитритом, сульфаниламидами), связывание гемоглобином кислорода сопровождается окислением Fe²⁺доFe³⁺и образованием метгемоглобина, более стойкого соединения, чем оксигемоглобин. При этом нарушается отдача кислорода тканям и развивается гипоксия.

Продолжительность жизни эритроцитов в среднем колеблется от 100 до 130 дней. В процессе старения в эритроците происходит ряд изменений, касающихся составных частей мембраны, ферментов и энергетических ресурсов клетки. Вследствие возрастного сокращения поверхности мембраны эритроцита уменьшается его способность деформироваться. Старые эритроциты, характеризующиеся повышенной ригидностью, проходя через мелкие (3-4 микрон) отверстия венозных синусов селезенки разрушаются, а затем их фрагменты фагоцитируются макрофагами. Не исключен также избирательный фагоцитоз макрофагами старых эритроцитов. В физиологических условиях основным местом деструкции эритроцитов служат органы, богатые клетками системы фагоцитирующих мононуклеаров: костный мозг, селезенка и печень.

После разрушения эритроцита и освобождения гемоглобина происходит отщепление гема от глобина.

Полипептидные цепи глобина гидролизуются на отдельные аминокислоты, которые затем вновь используются в синтезе гемоглобина. Протопорфириновое кольцо гема образует открытое тетрапирольное соединение – биливердин, быстро преобразующийся в билирубин. В ходе этой реакции отщепляется молекула окиси углерода, которая в виде карбоксигемоглобина транспортируется к легким, и освобождается железо. Большая часть освободившегося железа используется для новообразования гема. Избыток гемоглобинового железа откладывается в макрофагах в виде ферритина или гемосидерина – комплексов гидроокиси железа с белком апоферритином, которые отличаются друг от друга по содержанию белка и растворимости в воде.

В физиологических условиях весь образовавшийся в фагоцитирующих мононуклеарах неконъюгированный, плохо растворимый в воде билирубин связывается альбуминами плазмы.

В тех случаях, когда концентрация билирубина в плазме превышает возможности насыщения альбумина, билирубин откладывается в тканях, что клинически проявляется развитием желтухи. Транспортный комплекс билирубин-альбумин активно захватывается гепатоцитами печени, где с помощью энзима микросом – глюкуроновой трансферазы билирубин соединяется с глюкуроновой кислотой, образуя растворимое соединение билирубин-глюкоронид, который затем выделяется через билиарные пути в кишечник. Конъюгированный билирубин, обладающий незначительной способностью реабсорбироваться в кишечнике, под воздействием бактериальной флоры переходит в уробилиноген. Большая часть уробилиногена во время прохождения через кишечник гидролизируется до неконъюгированной формы – стеркобилина, который затем экскретируется, а меньшая часть реабсорбируется и затем выделяется либо печенью, либо почками. За сутки с мочой экскретируется до 3 мг уробилиногена.

Хотя большая часть гемоглобина разрушается в клетках системы фагоцитирующих мононуклеаров, небольшие его количества могут попадать в плазму, где они связываются α-глобулином (гаптоглобином). Выделяют несколько типов гаптоглобина, различающихся по своей электрофоретической подвижности. Гаптоглобин, содержащийся в 100 мл плазмы, способен связать 50-150 мг свободного гемоглобина. Комплекс гаптоглобин-гемоглобин не проходит через почечный фильтр и распадается в печени, костном мозге и селезенке. При повышенном внутрисосудистом разрушении эритроцитов, которое наблюдается при некоторых гемолитических анемиях, количество освобождающегося непосредственно в кровоток гемоглобина может превышать связывающую способность гаптоглобинов. При этом свободный гемоглобин может проходить через мембрану почечных клубков. Однако гемоглобинурия становится возможной лишь в тех случаях, когда весь экскретируемый гемоглобин не реабсорбируется почечными канальцами.

3. Железо, витамин В₁₂, фолаты и ферменты эритроцитов.

Железо играет важную роль в жизнедеятельности организма, обеспечивая транспортировку кислорода, входя в состав гемоглобина, миоглобина, систем цитохромов и некоторых окислительных ферментов.

В среднем в организме здорового человека содержится 3-4 г железа, 72,9% которого входит в состав гемоглобина, 3,3% – миоглобина и 16,4% находится в депо в виде ферритина и гемосидерина. Остальная часть находится в плазме и входит в состав различных железосодержащих ферментов (цитохромов, каталазы, пероксидазы и т.д.).

Суточная потребность организма в железе, равная 22-24 мг, в основном покрывается за счет железа, освобождающегося при распаде гема собственных эритроцитов.

Физиологическая потеря железа за счет слущивающегося эпителия, волос, ногтей, пота, мочи, кала и др. у взрослого мужчины составляет всего 1,0-1,2 мг в сутки, а у женщины детородного возраста в среднем 1,5-2 мг в сутки из-за потери железа с кровью при менструациях. Во время менструального цикла нормальной считается кровопотеря, равная 50 мл крови, или 25 мг железа. Однако, приблизительно у 20% женщин эта кровопотеря превышает данные цифры, что создает предпосылку для развития дефицита железа в организме, а затем и железодефицитной анемии.

Значительная потеря железа происходит во время беременности, родов и при грудном вскармливании. Беременная женщина передает плоду 350 мг железа, 200 мг остается в крови плаценты; во время физиологических родов женщина теряет 50-100 мл крови или 25-50 мг железа; во время грудного вскармливания мать передает ребенку примерно 450 мг железа. Таким образом, общая потеря железа равна 1000-1100 мг железа, что составляет 1/3 запаса железа организма женщины. При обычном питании эта потеря восстанавливается только через 4 года.

У здорового человека физиологическая потеря железа компенсируется железом, поступающим с пищей. В дневном рационе в среднем содержится около 14 мг железа, из которых только 1-2 мг (5-10%) абсорбируется в желудочно-кишечном тракте. Различают две формы пищевого железа: неорганическое (в виде ионов Fe³⁺ иFe²⁺) и органическое, содержащееся в гемоглобине и миоглобине. Неорганическое железо становится доступным для усвоения по мере его высвобождения из пищевых продуктов в процессе пищеварения. ИоныFe³⁺ иFe²⁺образуют растворимые, низкомолекулярные комплексы с (муко)полисахаридами и аминокислотами (хилаты), всасывание которых в основном осуществляется в двенадцатиперстной кишке и верхнем отделе толстой кишки. Гемоглобин и миоглобин, попадая в клетки слизистой кишечника, отщепляет железо внутриклеточно. Роль желудочной секреции в процессе всасывания железа невелика. Соляная кислота лишь несколько усиливает всасывание солей двухвалентного железа и не влияет на абсорбцию неорганического железа.

Всасывание железа регулируется на клеточном уровне. Клетки эпителия тонкого кишечника получают информацию о потребностях в железе всего организма. При железодефицитных состояниях абсорбция железа эпителиальными клетками увеличивается. Напротив, при перегрузке организма железом всасывание его в кишечнике уменьшается. При этом железо откладывается в клетках эпителия тонкого кишечника в виде ферритина, небольшая часть которого проникает в плазму, тогда как большая его часть выделяется в просвет кишки вместе со слущивающимся эпителием. Развивается так называемый ферритиновый занавес или мукозальный блок.

Прошедшее через эпителий кишечника железо поступает в плазму, где связывается с трансферрином, относящимся к группе β-глобулинов. С помощью трансферрина железо переносится от места его всасывания или распада гемоглобина к костному мозгу, селезенке и др. Большая часть депонированного железа находится в макрофагах (сидерофагах) в виде ферритина (80%) и гемосидерина (20%).

Мерой количества свободного трансферрина в плазме служит общая железосвязывающая способность сыворотки (ОЖСС). Ненасыщенная или латентная железосвязывающая способность сыворотки (НЖСС или ЛЖСС) свидетельствует о резервной способности плазмы связывать железо. В норме трансферрин насыщен железом не полностью, а приблизительно на одну треть. При дефиците железа процент насыщения трансферрина снижается; напротив, при патологических состояниях, связанных с повышенным всасыванием железа, трансферрин насыщается почти полностью. У здорового человека в 1 литре сыворотке содержится 2,0-4,0 г трансферрина.

При взаимодействии в костном мозге комплекса железо-трансферрин и эритробластов происходит либо отщепление железа и его включение в мембрану клеток-предшественников эритроцитов, либо комплекс захватывается целиком, после чего транспортный белок быстро возвращается в плазму. В цитоплазме эритробластов железо, не использованное для синтеза гемоглобина, обнаруживается в мицеллах митохондрий и при морфологических исследованиях выявляется в виде гранул.

Эритробласты, содержащие такие гранулы, называются сидеробрастами и составляют 10-15% всех созревающих клеток-предшественников эритроцитов.

При недостаточности железа наблюдается определенная последовательность уменьшения его запасов. Первыми признаками дефицита железа являются исчезновение гранул ферритина в макрофагах и увеличение абсорбции экзогенного железа. При более значительном дефиците железа (латентной недостаточности) развивается гипоферремия, увеличивается ЛЖСС и уменьшается число сидеробластов. Выраженная недостаточность железа вызывает снижение уровня гемоглобина, гематокрита и уменьшение содержания гемоглобина в эритроците.

Тяжелая недостаточность железа ведет к поражению системы ферментов, что вызывает нарушение окислительных процессов в клетках, и трофическим расстройствам.

Витамин В₁₂или цианкобаламин по своей структуре напоминает гем, поскольку также состоит из 4 пирольных групп, однако, соединенных не с железом, а с кобальтом. Витамин В₁₂синтезируется рядом микроорганизмов. Человек покрывает свои потребности в витамине В₁₂за счет продуктов животного происхождения (молока, мяса, яиц и т.д.). Овощи и фрукты практически лишены витамина В₁₂. При обычной диете в течение дня человек получает от 3 до 30 мкг витамина В₁₂, тогда как суточная потребность в нем составляет 2-4 мкг. Запасы витамина В₁₂в организме при нормальном питании равны в среднем 3000 мкг (3 мг), причем большая часть (около 2000 мкг) витамина В₁₂содержится в печени.

Для абсорбции витамина В₁₂, находящегося в пище, необходимо присутствие в желудке внутреннего фактора – глюкопротеина, который вырабатывается железами фундального отдела желудка в количестве, в 100 превышающем потребности, необходимые для абсорбции витамина В₁₂. Секреция внутреннего фактора и соляной кислоты стимулируется гормонами гастрином, гистамином и инсулином. Витамин В₁₂, высвобождающийся из пищи под действием ферментов желудочного содержимого, быстро соединяется с внутренним фактором, образуя комплекс, устойчивый к действию протеолитических энзимов. Всасывание витамина В₁₂при нейтральном рН происходит в дистальном отделе тонкого кишечника, клетки слизистой которого обладают рецепторами, специфичными для комплекса «витамин В₁₂-внутренний фактор». Количество этих рецепторов, по-видимому, ограничено, так как во время каждого приема пищи всасывается не более 2 мкг витамина В₁₂, что при трехразовом питании составляет 6 мкг в сутки. На поверхности или внутри эпителиальных клеток, выстилающих ворсинки тощей кишки, происходит медленное освобождение витамина В₁₂из комплекса с внутренним фактором. Только через 3-4 часа после приема пищи витамин В₁₂начинает поступать в кровь портальных вен, достигая максимальной концентрации к 8-12 часам.

В плазме витамин В₁₂соединяется с двумя транспортными белками: транскобаломиномIи транскобаломиномII, располагающимися при электрофорезе в области α- и β-глобулинов. Большая часть витамина В₁₂переносится транскобаломиномI, а меньшая - транскобаломиномII, который быстро отдает его тканям. Комплекс «витамин В₁₂-транскоаломинI», напротив, довольно долго сохраняется в циркуляции. ТранскобаломинIIсинтезируется в печени, тогда как транскобаломинIвырабатывается лейкоцитами и, возможно, клетками других тканей.

Для определения концентрации витамина В₁₂в плазме в основном используютсямикробиологическиеметоды. У здорового человека в крови содержится от 160 до 1000 пг/л витамина В₁₂.

Термином «фолаты» обозначается группа соединений, основой которых является фолиевая или птероилглютаминовая кислота. Фолаты широко распространены в пищевых продуктах как растительного, так и животного происхождения. Особенно богаты фолатами овощи (капуста, шпинат, салат и др.) и некоторые фрукты (лимоны, бананы и др.). Фолаты мало устойчивы к нагреванию, воздействию атмосферного кислорода и ультрафиолетового света, поэтому в процессе приготовления пищи большая их часть разрушается.

При обычном питании в суки человек получает от 200 до 400 мкг фолатов при средней суточной потребности в 50-100 мкг. Общее количество фолатов в организме около 10 мг. Таким образом, запасы фолатов, учитывая ежедневную потребность в них, значительно меньше запасов витамина В₁₂. Всасывание фолатов осуществляется, главным образом, в проксимальных отделах тощей кишки. Проходя через слизистую кишечника, молекулы фолатов изменяются таким образом, что в кровь поступает только 5-метилтетрагидрофолаты. Концентрация фолатов в сыворотке здорового человека равна 3-15 мг/л, а в эритроцитах – 160-610 мг/л.

Витамин В₁₂и фолаты в качестве коэнзимов принимают участие в синтезе нуклеотидов, поэтому их недостаточное поступление приводит к нарушению синтеза ядерного ДНК в эритроидных клетках. Морфологически это проявляется асинхронизмом созревания ядра и цитоплазмы в виде отставания процесса обратного развития ядерных структур при сравнительно неизменной скорости гемоглобинизации цитоплазмы. При дефиците витамина В₁₂и фолатов развивается так называемое мегалобластическое кроветворение, при котором клетки красного ряда (мегалобласты) характеризуются большими, чем эритробласты, размерами, сохранением нежной структуры хроматина ядра при выраженной ацидофилии цитоплазмы и нередко преобладанием базофильных форм. Для элементов гранулоцитопоэза свойственна задержка вызревания и наличие гигантских миелоцитов, метамиелоцитов, палочкоядерных лейкоцитов и гиперсегментации ядер нейтрофилов. Большинство мегалобластов с завершенной гемоглобинизацией цитоплазмы, но с сохранившимся ядром распадается в костном мозге (неэффективный эритропоэз), и лишь незначительная часть вызревает до конечной стадии своего развития – гигантских эритроцитов (мегалоцитов), которые поступают в циркуляцию.

Для поддержания нормальной формы и способности деформироваться, для сохранения железа в двухвалентной форме (Fe²⁺) и для регуляции нормального внутриклеточного ионного взаимодействия и течения биохимических процессов эритроциты обладают набором ферментов. Часть ферментов содержится в мембране эритроцитов, участвуя в липидном обмене между оболочкой эритроцита и плазмой. Однако большая часть эритроцитарных ферментов расположена внутриклеточно.

В процессе гликолиза – анаэробного способа превращения глюкозы в молочную кислоту, при котором образуется АТФ – основной аккумулятор химической энергии клетки, участвуют: гексокиназа, гексофосфоизомераза, фосфофруктокиназа, тризофосфатизомераза, глицеральдегидфосфатдегидрогеназа, 2,3-фосфоглицераткиназа, пируваткиназа и другие ферменты.

В пентозофосфатном цикле – аэробном окислительном способе превращения глюкозы, с помощью которого метаболизируется около 10% глюкозы, в качестве катализаторов принимают участие глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФДГ) и 6-фосфоглюконатдегидрогеназа. Глютатион, предохраняющий важнейшие компоненты эритроцита от денатурации окислителями, перокисями и ионами тяжелых металлов, восстанавливается из окисной формы при помощи фермента редуктазы глютатиона. Большая роль в реализации энергетических ресурсов эритроцитов принадлежит ферментам адениловой системы: АТФ-азе и аденилатциклазе, участвующих в расщеплении АТФ и освобождении энергии.

4. Иммунология эритроцитов.

На поверхности эритроцитов человека находится огромное количество антигенов, из которых в настоящее время известно более 250.

Антигены, которые, помимо эритроцитов человека, встречаются на эритроцитах других животных, называются гетерофильными антигенами.

Антигены, обнаруживаемые только на эритроцитах человека, но встречающиеся у всех людей, обозначаются как видовыеилинеспецифические антигены.

Антигены, свойственные лишь для эритроцитов ограниченной популяции людей и определяющие группу крови человека, носят название групповыхилиспецифических антигенов. Для каждого человека характерно индивидуальное сочетание специфических антигенов. В группе специфических антигенов, которые среди эритроцитарных антигенов имеют наибольшее клиническое значение, важнейшими являются антигены системы АВО, Резус, Льюис,MNS,I,P, Лютеран, Келл, Даффи и Кидд.

Антигены системы АВО. В системе АВО антигены А и В могут присутствовать в эритроцитах по одному (только А или только В) или вместе (АВ). Отсутствие обоих антигенов обозначается как группа 0. Гены, ответственные за синтез антигенов А и В, передаются по доминантному типу, т.е. наследование гена всегда проявляется присутствием антигена.

Четыре возможных сочетания антигенов системы АВО, три из которых были открыты Ландштейнером в 1900 году, определяют 4 главные разновидности человеческих эритроцитов:

1. Группа А – эритроциты содержат антиген А (у 44,7% людей),

2. Группа В – эритроциты содержат антиген В (у 8,6% людей),

3. Группа АВ – эритроциты содержат оба антигена (у 3,2% людей),

4. Группа 0 – эритроциты лишены обоих антигенов (у 43,5% людей).

У людей с группой А выделяют несколько вариантов антигена А: сильный антиген А (75%), обнаруживающий полную А-антигенную активность, и более слабый антиген А₂(около 25%), обладающий ¼ антигенных детерминант А и, возможно, отличающийся от него также и качественно. Кроме того, существуют другие редко встречающиеся варианты антигена: А₃, А₀, А_mиA_end.

Антиген В не столь сложен, как антиген А, однако, также известны его сильные и слабые варианты. Антигены А и В, а также антигены системы Льюис являются гликопротеинами, аминопептидная цепь которых содержит 15 аминокислот. Все они являются производными антигена Н, к полипептидной цепи которого под контролем генов А, В или Льюис добавляются дополнительные аминокислоты. Только в эритроцитах группы 0, в которых антигены А и В отсутствуют, содержится базовая антигенная структура или антиген Н.

У людей с редкой группой крови «Бомбей» ген Н заменен рецессивным аллелем h, который не способен вырабатывать вещество Н-антигена. Поскольку Н-антиген отсутствует , не образуется ни А-, ни В-антигенов, несмотря на возможное наличие соответствующих генов. Эта группа крови обозначатся какOh.

А-, В- и Н-антигены входят в состав мембран не только эритроцитов, но и большинства клеток организма, включая лейкоциты и тромбоциты. В водорастворимой форме эти антигены присутствуют в тканях у 80% людей, а у так называемых выделителей, которые обладают секреторным геном Se– в секретах. У таких людей растворимые антигены системы АВО обнаруживаются в плазме, слюне, меконии, сперме, моче, желудочном соке, поте, слезах и желчи, но отсутствуют в спинномозговой жидкости.

Антигены системы АВО чрезвычайно устойчивы и их определение в высохшей крови и других продуктах жизнедеятельности человека используется в судебной медицине. Интересно, что АВН-антигены до сих пор обнаруживаются в египетских мумиях.

Антигены системы Резус (Rh). Система Резус, как и система АВО, играет ведущую роль в трансфузиологической практике. Это объясняется высокой антигенной активностьюRh(D)-фактора, способного вырабатывать соответствующие антитела у нередко встречающихсяRh-отрицательных лиц. Антирезусные антитела обнаруживают наибольшую активность при температуре тела и могут проникать через плацентарный барьер, чем и объясняется их ведущее значение в развитии гемолитической болезни новорожденных. Продукция эритроцитарных антигенов системы Резус контролируется тремя парами близко расположенных на одной хромосоме генов:Dd,CcиEe. Возможны следующие комбинации резусных генов:Cde(R¹),cDE(R²),cDe(R⁰),CDE(R^R),cde(r),cdE(r’),cdE(r’’) иCdE(R^y). Определение «резус-положительные» используется для эритроцитов, содержащих антигенD. Эритроциты, которые на основании отсутствия взаимодействия с анти-Dантисывороткой отнесены кRh-отрицательным, могут обладать С- и Е-антигенами системы Резус. ИстинноRh-отрицательные эритроциты не содержатC-,D- иE-антигенов. Однако, в трансфузиологической практике кровь с С- и Е-антигенами (группыr’ иr’’) в эритроцитах рассматривается какRh-отрицательная.

Группы крови системы Резус (по Chanarinс соавт.)

CDE-номенклатура	Групповые символы	Частота распространения
CDE/cde	RIr	32%
CDe/CDe	RIRI	17%
cde/cde	rr	15%
CDe/cDE	RR2	14%
cDE/cde	R2r	13%
cDE/cDE	R2R2	3%
cDe/cde	R0r	1%

Другие групповые антигены систем MNS, Льюис (Le),Pp,iI, Келл (К), Даффи (Fy), Кидд (JK), Лютеран (Lu) обычно не учитываются в рутинной трансфузиологической практике. Однако, несовместимость по антигенам этих систем может обусловить изосенсибилизацию, являющуюся причиной тяжелых гемолитических реакций и гемолитической болезни новорожденных. Кроме того, против некоторых из этих антигенов могут также вырабатываться аутоантитела при аутоиммунных гемолитических анемиях.

Антиэритроцитарные антитела– это сывороточные иммуноглобулиныG,MиA, обладающие способностью образовывать специфические комплексы с соответствующими антигенами эритроцитов.

В зависимости от диапазона антигенной направленности различают:

• гетероантитела, активные в отношении эритроцитов не только человека, но и других животных;

• неспецифические антитела или панагглютинины, действующие на все разновидности человеческих эритроцитов;

• изоантитела или групповые антитела, направленные против определенных групповых антигенов эритроцитов.

По механизму образования антиэритроцитарные антитела делятся на естественные и иммунные.

Естественныеантитела появляются в плазме человека без явного контакта с соответствующим антигеном, причем их продукция находится под генетическим контролем. Естественные антитела обнаруживаются в сыворотке людей, не содержащих в эритроцитах группового антигена, против которого данные антитела направлены. Естественные антитела в основном относятся к иммуноглобулинам М (IgM) и наиболее активно взаимодействуют с соответствующим антигеном при низкой температуре, т.е. являютсяхолодовыми антителами. Так, в сыворотке людей находятся антитела к антигенами А и В системы АВО: анти-А антитела при группе крови В, анти-В антитела при группе крови А и анти-А+В антитела при группе крови О. чистые анти-Н антитела обнаруживаются только при группе кровиOh«Бомбей». Кроме того, иногда встречаются естественные антитела к антигенамM,N,Le^aиLe^b(Льюис),PиI.

Иммунныеантитела, в отличие от естественных, образуются только после контакта с соответствующим антигеном эритроцитов, который может произойти в результате переливания несовместимой крови или беременности плодом, не совместимым по антигенамRh(D),ABO,K,Fy^a,Fy^b,JK^а,JK^b,Lu^aиLu^b.

В группе иммунных антител наиболее важное клиническое значение имеют аутоиммунные антитела, направленные против групповых антигенов собственных эритроцитов.

Большинство иммунных антител относится к иммуноглобулинам класса G, реже – М и А. они могут обнаруживать наибольшую активность или при температуре тела (тепловые антитела), или при низкой температуре (холодовые антитела), или фиксироваться на эритроцитах при низкой температуре, а оказывать повреждающее действие при температуре тела (двухфазные антитела Донат-Ландштейнера). По механизму действия антиэритроцитарные антитела разделяются на:

• агглютинины – антитела, вызывающие склеивание (агглютинацию) эритроцитов,

• гемолизины – антитела, вызывающие лизис эритроцитов,

• опсонины – антитела, способствующие фагоцитозу эритроцитов.

Агглютининыявляются наиболее часто встречающейся разновидностью антиэритроцитарных антител.

В зависимости от серологических особенностей выделяют два основных типа агглютининов: полные и неполные.

Полные агглютининыспособны вызывать склеивание эритроцитов, содержащих соответствующий антиген, в любой среде: водно-солевой или коллоидной. Большинство полных агглютининов относится кIgM, поскольку этот тип иммуноглобулинов обладает наиболее крупной молекулой, по-видимому, способной преодолеть отрицательные электростатические взаимодействия, которые существуют между отдельными эритроцитами. Кроме того, молекулаIgMполивалентна, что способствует ее более прочной фиксации на поверхности эритроцита. К полным агглютининам в основном относятся естественные антитела, а также иммунные антитела против антигенов системы Резус. Для выявления полных антител достаточно смешать взвесь эритроцитов в физиологическом растворе с исследуемой сывороткой.

Неполные антитела, относящиеся, главным образом, к иммуноглобулинам классовG(IgG) иA(IgA), характеризуются неспособностью вызывать агглютинацию эритроцитов в водно-солевой среде. Склеивание эритроцитов неполными антителами происходит только в коллоидной среде, а в водно-солевой среде они лишь абсорбируются на поверхности эритроцитов, содержащих соответствующий антиген, сенсибилизируя их.

Для обнаружения неполных антител необходимо изменить электростатические силы, вызывающие отталкивание эритроцитов, с тем, чтобы создать условия для максимального сближения сенсибилизированных эритроцитов и их агглютинации под действием фиксированных на поверхности антител.

Это достигается либо добавлением коллоидных растворов (альбумин, декстран, плазма и др.), по-видимому, уменьшающих диэлектрическую константу среды (проба на агглютинацию в коллоидной среде), либо обработкой эритроцитов протеолитическими ферментами (трипсин, папаин и др.), которые удаляют с мембраны сиаловые кислоты и тем снижают отрицательный заряд эритроцитов (проба на агглютинацию трипсинизированных эритроцитов).

Однако, основным методом выявления фиксированных на эритроцитах неполных агглютининов является прямая антиглобулиновая проба или прямая проба Кумбса. Эта проба основывается на способности антиглобулиновой сыворотки, полученной иммунизацией животных глобулиновой фракцией плазмы человека, содержащей полные антитела, агглютинировать в альбуминовой среде сенсибилизированные эритроциты, на поверхности которых фиксированы неполные антитела, являющиеся α- или β-глобулинами (рис.2).

Кроме антиглобулиновой сыворотки в пробе Кумбса могут использоваться антисыворотки к различным классам иммуноглобулинов (G,MилиA) человека, что позволяет уточнить иммунохимические характеристики антител, содержащихся на поверхности эритроцитов. Применение в прямой пробе Кумбса антикомплементарной антисыворотки дает возможность выявить на поверхности эритроцитов активированные компоненты системы комплемента, принимающие активное участие в некоторых аутоиммунных реакциях.

Для обнаружения в сыворотке больного аутоантител используется непрямая проба Кумбса, которая проводится в два этапа. На первом этапе исследуемая сыворотка инкубируется с нормальными (донорскими) эритроцитами, причем используется раздельная инкубация с несколькими образцами донорских эритроцитов. При этом неполные агглютинины фиксируются на эритроцитах, не вызывая их агглютинации. Второй этап соответствует прямой пробе Кумбса, то есть к донорским эритроцитам добавляется антиглобулиновая сыворотка. В случае агглютинации донорских эритроцитов подтверждается наличие в сыворотке больного аутоантител.

Для повышения чувствительности прямой пробы Кумбса, которая может давать отрицательные результаты при небольшом количестве антител на поверхности эритроцитов, применяется предварительная обработка эритроцитов протеолитическими ферментами (трипсин-Кумбс-тест или проба Унгера) или принцип агрегат-геммаглютинации (А.И. Соловников с соавт.). В агрегат-геммагглютинационной пробе иммунные белки антиглобулиновой сыворотки фиксируются на поверхности эритроцитов донора ORh⁺, стабилизированных и активированных глютаральдегидом. Приготовленные таким образом тест-эритроциты используются в прямой антиглобулиновой пробе вместо антиглобулиновой сыворотки, что повышает чувствительность пробы Кумбса в 64-128 раз.

Гемолизинывстречаются реже, чем антиагглютинины. Гемолизины могут как сопутствовать агглютининам, так и обнаруживаться изолированно. В зависимости от температурного оптимума различают тепловые, холодовые и двухфазные гемолизины. Большинство гемолизинов относится кIgG, реже кIgMиIgA. Фиксируясь на поверхности эритроцитов, обладающих соответствующим антигеном, гемолизины вызывают деструкцию эритроцитов через активацию системы комплемента (С).

Девять компонентов комплемента находятся в плазме в неактивной форме. Молекулы гемолизинов, находящиеся на поверхности эритроцитов, соединяются с первым компонентом комплемента (С1), переводя его в ферментативно активную форму (С1а). Протеолитическое действие С1а вызывает отщепление части молекул от С4 и С2, которые после этого приобретают эстеролитическую активность (С4а и С2а). С4а фиксируется на поверхности эритроцитов и в присутствии IgMобразует комплекс с С2а, который, хотя и является непрочным, действует как энзим на С3. Активированные молекулы С3а, обладающие пептидазной активностью, прочно закрепляются на мембране сенсибилизированных эритроцитов и способны вызвать ее повреждение. В процессе активации С3 комплексом С4а-С2а отщепляется анафилотоксин (часть молекулы С3), который усиливает сосудистую проницаемость и другие реакции воспалительного процесса. Активация С3 является важнейшим звеном последующей активации фиксации на эритроцитарной мембране С5, С6, С7, С8 и С9, протеолитическое действие которых вызывает лизис эритроцитов. Возможен и иной путь активации С3 через действие находящегося в плазме активатора С3, который переходит из проэнзимной формы в энзим под влиянием другого плазменного белка-пропердина. Выявляются гемолизины по аутогемолизу сенсибилизированных эритроцитов в условиях избытка комплемента и по обнаружению на поверхности эритроцитов активированных компонентов комплемента с помощью прямой пробы Кумбса, в которой используется антикомплементарная сыворотка.

Опсонинаминазываются антитела, способствующие фагоцитозу эритроцитов нейтрофилами и моноцитами. Опсонины обычно обнаруживаются одновременно с холодовыми гемолизинами. Выявляются опсонины по эритрофагоцитозу, наступающему после инкубации исследуемой крови.

5. Морфофизиология эритроцитов.

Основная масса форменных элементов циркулирующей крови представлена эритроцитами. В организме здорового мужчины содержится 30 мл эритроцитов на кг веса тела, а женщины – 25 мл/кг. Таким образом, при весе в 70 кг масса циркулирующих эритроцитов у мужчины равна 2,1 л, а у женщины – 1,7 л. Масса циркулирующих эритроцитов определяется по степени разведения внутривенно введенных эритроцитов, предварительно меченых ⁵¹Cr. В клинической практике для оценки массы циркулирующих эритроцитов широко используется показатель гематокрита, который соответствует выраженной в процентах или объемных единицах массе эритроцитов венозной крови после ее центрифугирования в гематокритной трубке в стандартных условиях до получения плотного столбика эритроцитов.

Нормальные показатели гематокрита: для мужчин – 0,41-0,53%, для женщин — 0,36-0,46%. У новорождённых гематокрит примерно на 20 % выше, а у маленьких детей — примерно на 10 % ниже, чем у взрослого.

Нормальные показатели концентраций гемоглобина и числа эритроцитов у людей, живущих на уровне моря, колеблется для мужчин в пределах 130-177 г/л и 4,6-6,5х10¹²/л соответственно, а для женщин – 117-157 г/л и 3,8-5,8х10¹²/л соответственно.

На концентрацию гемоглобина и число эритроцитов значительное влияние оказывает высота проживания в горных районах: у таких людей эти показатели заметно возрастают.

Важным показателем для оценки функции эритроцита является содержание в нем гемоглобина, оно оценивается по следующим показателям:

1. Среднее содержание Hbв эритроците (MeanCorpuscularHemoglobin,MCH), 27-32 пг;

2. Средняя концентрация Hbв эритроците (MeanCorpuscularHemoglobinConcentration,MCHC), 310-350 г/л;

3. Цветовой показатель (ЦП), 0,8-1,0 (используется преимущественно в России);

4. Средний объем эритроцита (MeanCorpuscularVolume), 78-99 дл.

В свежем, нефиксированном состоянии зрелые эритроциты имеют форму двояковогнутых, круглых или слегка овальных дисков, окрашиваемых эозином в розовый цвет и не содержащих базофильной пунктуации.

Форма эритроцита соответствует его равномерному насыщению кислородом.

Кроме зрелых эритроцитов в крови здорового человека содержится 0,2-1,2% ретикулоцитов – молодых полихроматофильных эритроцитов, содержащих базофильную пунктуацию в цитоплазме, которая представляет собой остатки ядерных структур. Повышение числа ретикулоцитов обычно свидетельствует об усилении активности эритропоэза и при описании мазка крови описывается как полихромазия.

При различных нарушениях эритропоэза (гемолитических анемиях, гиперспленизме, отравлениях гемолитическими ядами, а также после спленэктомии) в эритроцитах могут наблюдаться тельца Ховелл-Жоли – округлые хроматиновые образования диаметром 1 мкм и более (остатки ядер эритробластов), окрашивающиеся в вишневый цвет; кольца Кебота, имеющие вид кольца, восьмерки или скрипичного ключа, которые, по-видимому, являются остатками ядерной оболочки; тельца Папенгеймера – гранулы железа; базофильная зернистость насыщенного синего цвета, появляющаяся в результате агглютинации и склеивания рибосом, и тельца Гейнца, являющиеся скоплениями денатурированного гемоглобина.

Эритроциты здорового человека относительно однородны по размеру диаметра, равного 6,7-7,7 мкм, по объему (в среднем – 89 мкм³), толщине (в среднем 2,1 мкм) и насыщенности гемоглобином. Эритроциты с диаметром более 8,7 мкм обозначаются как макроциты, а с диаметром более 12 мкм – как мегалоциты. Эритроциты малого диаметра (<6,7 мкм) носят название микроцитов.

Значительные колебания размеров эритроцитов, обнаруживаемые при просмотре мазка крови, обозначаются как анизоцитоз. Снижение насыщения эритроцитов гемоглобином описывается как гипохромия. Для гипохромных эритроцитов, как правило, микроцитов, характерно бледное окрашивание, особенно в центре клетки, снижение ЦП, MCHиMCHC.

При увеличении толщины клетки, которое имеет место в шаровидных эритроцитах, создается впечатление о перенасыщенности ее гемоглобином или гиперхромии. Однако, истинной гиперхромии не существует. Термин «гиперхромные» обычно используется для характеристики эритроцитов, чаще мегалоцитов, содержащих больше гемоглобина в каждой отдельной клетке, чем нормоциты. Поскольку размеры мегалоцитов также превышают размеры нормальных эритроцитов, то средняя концентрация гемоглобина в отдельном мегалоците равна этому показателю для нормоцитов.

Распределение гемоглобина по периферии и в центре клетки, напоминающее мишень, дало основание для введения термина «мишеневидные эритроциты» (targetcells). Наличие в мазке крови эритроцитов с различной насыщенностью гемоглобином обозначается каканизохромия, а присутствие двух эритроцитарных популяций: нормохромной и гипохромной – какдиморфизм.

Для характеристики изменений формы эритроцитов, которые наблюдаются при различных патологических состояниях, используются следующие термины:

• Сфероцитоз – шаровидные эритроциты, обычно с диаметром < 6 мкм и показателем сферичности (отношением диаметра и толщины) > 3;

• Стомацитоз – эритроциты с вытянутым в виде полоски просветлением в центре, напоминающим форму рта;

• Овалоцитоз (эллиптоцитоз) – эритроциты, имеющие форму вытянутого овала или эллипса;

• Акантоцитоз – эритроциты с отросчатым контуром мембраны;

• Дрепаноцитоз – эритроциты, имеющие серповидную или полулунную форму;

• Шистоцитоз (шизоцитоз) – фрагментированные эритроциты.