Все лк фарм бт
.pdf
Проблема №5 – нестабильность генома клеток
Регуляторные требования
Необходимо создание банков клеток.
Необходимо исследовать стабильность используемых продуцентов:
|
1. |
Исследование проводится в двух точках – ранние пассажи и предельный для производства |
|
|
возраст |
|
2. |
Подтвердить неизменность кодирующей области экспрессионной конструкции |
21 |
3. |
Показать, что качество целевого продукта не меняется на разных генерациях |
|
4. |
Подтвердить, что применяемые условия консервации не влияют на возможность производства |
|
|
продукта |
Система банков клеток
Клетки на ранних пассажах (исследовательский/предварительный банк клеток)
Главный банк клеток (ГБК)
(100-200 виал)
22 |
Рабочий банк клеток (РБК) |
|
(100-500 виал) |
Криоконсервация клеток
23
Криоконсервация клеток
24
Регуляторные требования в отношении продуцентов
В досье на препарат необходимо указывать:
1. Источник клеток, история культивирования, получение клеточного субстрата
Необходимо повести тщательный анализ процессов, при использовании которых возможен занос инфекционных агентов.
2. История создания банка клеток (системы банков клеток)
Необходимо описать технологию создания и поддержания банка клеток, скорость его расходования, интервалы между созданием новых банков, показатели, по которым аттестуются банки.
25 |
3. Тестирование банка клеток |
|
|
|
Необходимо установить наличие примеси других клеточных линий, посторонних агентов, эндогенных |
|
агентов и молекулярных контаминантов, т.е. подтвердить подлинность, чистоту и пригодность |
|
клеточного субстрата для использования в производстве. |
|
В некоторых случаях целесообразно проводить проверку на туморогенность и кариотипирование. |
|
Необходимо установить стабильность клеток в ходе культивирования. |
Тестирование банка клеток
1.Подлинность
1.Изоферментный анализ
2.Дифференциальное окрашивание хромосом
3.Анализ ДНК для обнаружения геномного полиморфизма
2.Чистота
1.Бактерии
2.Грибы
3.Микоплазма
4.Вирусы
3.Стабильность
1.Исследование проводится в двух точках – ранние пассажи и предельный для производства
26 |
возраст |
2.Подтвердить неизменность кодирующей области экспрессионной конструкции
3.Показать, что качество целевого продукта не меняется на разных генерациях
4.Подтвердить, что применяемые условия консервации не влияют на возможность
производства продукта
Проблемы, связанные с использованием клеток млекопитающих
Проблема №1 – бессмертие клеток Проблема №2 – вирусная контаминация Проблема №3 – микробная контаминация Проблема №4 – перепутывание клеток
Проблема №5 – нестабильность генома клеток
27
Регуляторные требования в отношении продуцентов
В досье на препарат необходимо указывать:
1. Источник клеток, история культивирования, получение клеточного субстрата
Необходимо повести тщательный анализ процессов, при использовании которых возможен занос инфекционных агентов.
2. История создания банка клеток (системы банков клеток)
Необходимо описать технологию создания и поддержания банка клеток, скорость его расходования, интервалы между созданием новых банков, показатели, по которым аттестуются банки.
28 |
3. Тестирование банка клеток |
|
|
|
Необходимо установить наличие примеси других клеточных линий, посторонних агентов, эндогенных |
|
агентов и молекулярных контаминантов, т.е. подтвердить подлинность, чистоту и пригодность |
|
клеточного субстрата для использования в производстве. |
|
В некоторых случаях целесообразно проводить проверку на туморогенность и кариотипирование. |
|
Необходимо установить стабильность клеток в ходе культивирования. |
Тестирование банка клеток
1.Подлинность
1.Изоферментный анализ
2.Дифференциальное окрашивание хромосом
3.Анализ ДНК для обнаружения геномного полиморфизма
2.Чистота
1.Бактерии
2.Грибы
3.Микоплазма
4.Вирусы
3.Стабильность
1.Исследование проводится в двух точках – ранние пассажи и предельный для производства
29 |
возраст |
2.Подтвердить неизменность кодирующей области экспрессионной конструкции
3.Показать, что качество целевого продукта не меняется на разных генерациях
4.Подтвердить, что применяемые условия консервации не влияют на возможность
производства продукта
Биофармацевтика - исторический экскурс
Первые годы развития производства рекомбинантных белков доминировали микробиальные процессы. Использование культур клеток сдерживалось следующими факторами:
Опасения по поводу вирусной безопасности
Дороговизна питательной среды
Низкие выходы целевых белков
30
Jagschies, G. & Lindskog, E. & Łacki, K. & Galliher, P.. (2018). Biopharmaceutical Processing:
Development, Design, and Implementation of Manufacturing Processes.