Все лк фарм бт
.pdf
Адгерантные vs суспензионные клетки
vs
11
Преимущества использования суспензионных клеток
Существенная экономия производственных площадей за счёт большей плотности клеток
Возможность мониторинга таких параметров процесса, как DO, рН, DCO2, биомасса и пр.
Возможность автоматизации процесса культивирования (и, как следствие, снижение потребности в персонале и уменьшение человеческого фактора)
Существенное снижение риска контаминации
12
Отсутствие необходимости использования сыворотки крови или её заменителей
Адгерантные vs суспензионные клетки
vs
13
Проблема №1 – бессмертие клеток
Регуляторные требования
В досье на препарат необходимо указывать:
Источник клеток, история культивирования, получение клеточного субстрата
14
Проблема №2 – вирусная контаминация
Клетки млекопитающих могут содержать:
полные вирусы с известными механизмами репликации
вирусные частицы, напоминающие ретровирусы
вирусные геномы или части геномов (гепатит В или вирус Эпштейн-Барр)
Первичные клетки почки обезьяны, используемые в 1950-1960 гг. для производства вакцин от полиомиелита, содержали около 20 латентных вирусов, некоторые из которых были смертельны для человека. Как минимум 23 человека погибли при неаккуратном обращении с этими клетками.
Вирусы могут попасть в клеточную линию не только от животного, но и в ходе
работ в лаборатории и на производстве.
15
Проблема №2 – вирусная контаминация
Регуляторные требования
Кроме полного описания истории получения клеточного субстрата, необходимо также:
Провести обширные испытания на наличие вирусов в клеточном банке
В технологии получения препарата предусмотреть стадии избавления от вирусов, случайно попавших в клеточную культуру на этапе производства
16
Проблема №3 – микробная контаминация
Микробная контаминация относительно просто детектируется по сравнению с контаминацией вирусной.
Регуляторные требования
Необходимо проводить тестирование банка клеток на наличие: Бактерий Грибов
Микоплазмы
17
В ходе производства и по его окончании проводится постоянный контроль микробного загрязнения.
Проблема №4 – перепутывание клеток
18
Проблема №4 – перепутывание клеток
Регуляторные требования
Необходимо проводить тестирование банков клеток на подлинность.
Используются такие методы как:
1.Изоферментный анализ
2.Дифференциальное окрашивание хромосом
3.Анализ ДНК для обнаружения геномного полиморфизма
19
Проблема №5 – нестабильность генома клеток
1.Любая иммортализованная клеточная линия склонна к постоянному и драматичному эффекту изменения генотипа внутри популяции
2.Хромосомы внутри популяции иммортализованных клеток имеют чёткую тенденцию к неравному их количеству в разных клетках и к изменению своей организационной структуры
3.Генетическое разнообразие стимулируется селективными силами
20