Все лк фарм бт

Проблема лимитирования роста клеток

33

Периодическое vs непрерывное культивирование

Перфузионное культивирование с отбором клеток (блидингом*)

34

*bleed – пускать кровь (англ.)

Культивирование адгерантных клеток на микроносителях

Этапы распластывания клеток на микроносителях

36

«Обросшие» микроносители под сканирующим электронным микроскопом

Культивирование адгерантных клеток на микроносителях

Для увеличения плотности клеток на микроносителях были разработаны

макропористые микроносители.

Размеры пор внутри микроносителя – 30-400 мкм (размер клетки – 10-20 мкм).

Классификация микроносителей по пористости:

 твёрдые (не пористые)  микропористые

 макропористые

37

Макропористые микроносители Cytopore (Cytiva) под электронным микроскопом

Культивирование адгерантных клеток на микроносителях

Материалы основы микроносителей – боросиликатное стекло, акриламид, силикон, целлюлоза, коллаген, различные виды пластика (полистирол, полиэтилен, полиэфир, полипропилен).

Материалы покрытия микроносителей – коллаген, фибронектин, витронектин, ламинин и пр.

Размеры микроносителей – от 10 мкм до 5 мм.

39

Культивирование адгерантных клеток на микроносителях

Преимущества:

возможность выращивания адгерантных клеток в плотной культуре (псевдосуспензия) и закрытых системах

возможность проведения перфузионных процессов

Недостатки:

высокие механические нагрузки на клетки из-за больших размеров и массы микроносителей

40 сложность разработки процесса культивирования

необходимость использования сыворотки для прикрепления клеток или дорогостоящих факторов адгезии

лимитирование по диффузии кислорода к клеткам (для макропористых микроносителей)

Разработка процесса культивирования

41

Ключевые параметры процесса культивирования

Тип процесса

Питательная среда и стратегия внесения подпитки

рН

Температура

Продолжительность процесса

Концентрация растворённого кислорода (DO)

Посевная концентрация клеток

42