Roschupkin_1975 / Приготовление яичных липопротеидов

Приложение к работе № 11/12

Методика приготовления суспензии липротеидов яичного желтка

для измерения кинетик индуцированной ионами Fe²⁺

хемилюминесценции

1. Осторожно отделить желток яйца от белка, стараясь добиться минимального загрязнения желтка белком.

2. Одну объемную часть свежего желтка смешать с 5 объемными частями калий-фосфатного буфера (КCl 115 mM; KH₂PO₄ 20 mM, рН 7,5).

3. Полученную смесь поместить на магнитную мешалку и подвергнуть интенсивному перемешиванию в течение 10-15 минут.

4. Готовой суспензии яичного липопротеида дать отстояться при комнатной температуре до опадания образовавшейся при перемешивании пены.

5. В образцы, предназначенные для измерения кинетик индуцированной ионами Fe²⁺, готовая суспензия яичных липопротеидов добавляется в количестве 1/10 общего объема образца. Остальную часть составляют буферные растворы и добавки (если таковые необходимы). При введении добавок количество добавляемого буферного раствора снижается на объем раствора добавки.

6. NB: Стандартная кювета хемилюминометра, на котором осуществляются измерения, рассчитана на образец объемом 10 мл. Превышение этого объема может привести к разбрызгиванию образца в кюветной камере при перемешивании и загрязнению апертуры фотоэлектронного умножителя.

7. При установке кюветы в кюветное отделение хемилюминометра следует обратить внимание на то, чтобы имеющиеся на крышке кюветного отделения мешалка и зонд для введения добавок при закрывании крышки обязательно попали в образец. Следует также убедиться в том, что мешалка включена и вращается.

8. Перед открыванием кюветного отделения хемилюминометра следует обязательно убедиться, что шторка фотоэлектронного умножителя закрыта. В противном случае прибор выйдет из строя на значительное время.