Основные методы выявления микроорганизмов

1. Микроскопические методы включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировочный характер, так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных особенностей.

2. Микробиологические методы позволяет точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале: включает культивирование, выделение чистой культуры и идентификацию микроорганизмов с учетом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств.

3. Биологические методы направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя, включают заражение лабораторных животных с последующим исследованием их.

4. Серологические методы выявления специфических антител и антигенов возбудителя - важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний.

Аллергологические методы. Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний (кожно-аллергические пробы).

Микроскопия — зрительное исследование различных мелких объектов (от 0,2 до 0,0000002 мм) при помощи микроскопа (с увеличением от нескольких десятков до сотен тысяч раз). Обычный световой микроскоп (см.) используется в тех случаях, когда структуры объекта достаточно контрастны и хорошо различимы. Световая микроскопия позволяет получить увеличенное и подвижное изображение, провести микрофото- и киносъемку, длительно наблюдать один и тот же объект. В тех случаях, когда объекты микроскопии недостаточно контрастны, для их изучения применяют специальные методы световой микроскопии. 1. Микроскопия в темном поле (и ее разновидность — ультрамикроскопия) основана на том, что мельчайшие частицы, лежащие за пределами разрешающей способности микроскопа, становятся видимыми в лучах, идущих под таким большим углом, что в объектив они непосредственно не попадают (мощный пучок бокового света). В объектив попадает только свет,  отраженный   от этих частиц; при этом они выглядят светящимися точками на темном фоне. 2. Фазово-контрастная микроскопия позволяет резко повысить контрастность изображения объекта. Принцип метода состоит в выявлении сдвигов фазы световых колебаний, которые возникают, когда свет проходит сквозь структуру, имеющую показатель преломления, отличающийся от показателя преломления окружающей среды. Фазовые сдвиги глазом непосредственно не улавливаются, но в специальном фазово-контрастном микроскопе структуры, имеющие более высокий показатель преломления (даже совершенно прозрачные), оказываются более темными (или более светлыми в зависимости от конструкции прибора), чем окружающий фон. Подобного рода картина наблюдается и при так называемой амплитудно-контрастной или аноптральной микроскопии.

Флюоресцентная (люминесцентная) микроскопия позволяет изучать как собственную (первичную) флюоресценцию ряда веществ, так и вторичную флюоресценцию, вызванную окрашиванием клеточных структур специальными красителями — флюорохромами. Принцип метода состоит в том, что некоторые вещества при световом облучении начинают светиться сами. Для возбуждения флюоресценции в видимой части спектра обычно пользуются синим светом или ультрафиолетовыми лучами. Многие вещества, не флюоресцирующие в видимой области (в особенностинуклеиновые кислоты), при освещении ультрафиолетовыми лучами начинают флюоресцировать и могут выявляться без применения флюорохромов. К вторичной флюоресценции относится иммунофлюоресценция, основанная на взаимодействии иммунного белка с флюорохромами. См. также Микроскоп, Микроскопическая техника

Простые методы окраски предусматривают использование одного красителя и позволяют изучить морфологию бактерий. Краситель наносится на поверхность мазка, время окраски фуксином Пфейффера (1:10) составляет 1-2 мин., щелочным раствором метиленового синего Леффлера – 3-5 мин. После окраски красители сливают, препарат промывают водой и высушивают.

Сложные методы окраски: 2 разных красителя

напрмер по грамму, по цилю-нильсону, романовскому-гимзе)

Окраска по методу Грама:

- на препарат поместить фильтровальную бумажку, пропитанную раствором генцианвиолета (модификация Синева), смочить водой, красить 2 мин., слить;

- налить раствор Люголя — 1 мин., слить;

обесцветить 96° спиртом до отхождения струек краски, промыть водой;

докрасить водным фуксином Пфейффера (1:10) — 1 мин., промыть водой;

-высушить фильтровальной бумагой.

При окраске этим методом грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый, а грамотрицательные - в розово-красный цвет, что связано с особенностями строения и состава клеточной стенки.

Понятие об антигенах. Антигенная структура бактериальной клетки. Понятие о детерминантной группе.

Антигены- вещества различного происхождения, несущие признаки генетической чужеродности и вызывающие развитие иммунных реакций (гуморальных, клеточных, иммунологической толерантности, иммунологической памяти и др.).

Свойства антигенов, наряду с чужеродностью, определяет их иммуногенность-способность вызывать иммунный ответ и антигенность- способность (антигена) избирательно взаимодействовать со специфическими антителами или антиген- распознающими рецепторами лимфоцитов.

АГ м/б белки, полисахариды и нуклеиновые кислоты в комбинации между собой или липидами, являются любые структуры, несущие признаки генетической чужеродности и распознаваемые в этом качестве имм с-ой. Наибольшей иммуногенностью обладают белковые АГ, в том числе бактериальные экзотоксины, вирусная нейраминидаза.

Разделены на полные (иммуногенные), всегда проявляющие иммуногенные и антигенные свойства, и неполные (гаптены), не способные самостоятельно вызывать имм ответ.

Гаптены обладают АГтью, что обусловливает их специфичность, способность избирательно взаимодействовать с АТ или рецепторами лимфоцитов, определяться иммунологическими реакциями. Гаптены могут стать иммуногенными при связывании с иммуногенным носителем (например, белком), т.е. становятся полными.