Нингидриновая реакция на -аминокислоты

Принцип метода. Раствор белка при нагревании с разбавленным раствором нингидрина окрашивается в синий или фиолетовый цвет. Реакция обусловлена наличием в белке остатков а-аминокислот. При взаимодействии с нингидрином а-аминокислоты и пептиды окисляются и распадаются с образованием NH₃, R-COH и CO₂. Нингидрин восстанавливается и взаимодействует со второй молекулой нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение мурексидного строения, окрашенное в синий или фиолетовый цвет (комплекс Руэмана). Нингидриновая реакция может быть использована для количественного определения а-аминокислот в аминокислотных анализаторах.

Реактивы:

1. 1 % раствор яичного белка;

2. 1 % раствор желатина;

3. 0,5 % раствор нингидрина_.

Ход работы. Берут 3 пробирки; в первую вносят 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую- 5 капель 1 % желатина, в третью - 5 капель воды. В каждую пробирку добавляют по 5 капель 0,5 % раствора нингидрина. Кипятят 2 минуты в водяной бане. Следят за изменением окраски.

Результат:

Первая пробирка: _____________________________________________________________

_____________________________________________________________________________Вторая пробирка: ______________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Третья пробирка: ______________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты

Принцип метода. При смешивании раствора белка с концентрированной азотной кислоты белок сначала выпадает в осадок, при последующем нагревании растворяется и жидкость окрашивается в желтый цвет. Аминокислоты, имеющие в своем составе бензольное кольцо (фен, тир, три), вступают с азотной кислотой в реакцию нитрования с образованием нитросоединений желтого цвета.

Реактивы:

1. 1 % раствор яичного белка;

2. 1 % раствор желатина;

3. азотная кислота концентрированная (HNO₃)_.

Ход работы. Берут 3 пробирки: в первую вносят 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую – 5 капель 1 % желатина, в теретью - 5 капель воды. Затем в каждую пробирку добавляют по 5 капель концентрированной азотной кислоты (HNO₃ - агрессивная жидкость!). Кипятят 2 минуты в водяной бане. Регистрируют изменение цвета.

Результат:

Первая пробирка: _____________________________________________________________

_____________________________________________________________________________Вторая пробирка: ______________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Третья пробирка: ______________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Вывод: ______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________