Альбом по микробиологии 2012 / микробиология мой альбом.ворд / осенний семестр / Мой альбом осенний семестр ,занятия 14,15
.docx
Курс «Специальная Микробиология»
Раздел «Частная Вирусология»
Занятие: ________ Дата:__________
Тема:_______________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________
Таблица 1. РГА для индикации вируса гриппа в аллантоисной жидкости.
Ингридиенты |
Разведения вируссодержащего материала |
Контроль эритроцитов |
||||||||||
1:2 |
1:4 |
1:8 |
1:16 |
1:32 |
||||||||
Изотонический раствор хлорида натрия,мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
||||||
Аллантоисная жидкость (вируссодержащий материал), мл |
0,5 |
→ |
→ |
→ |
→ Вылить в дез. р-р. |
- |
||||||
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
||||||
Перемешать, инкубировать при комнатной температуре в течение 30-60 мин. |
||||||||||||
Результаты: |
|
|
|
|
|
|
||||||
Выводы: В аллантоисной жидкости обнаружен/не обнаружен вирус, обладающий гемагглютинирующей способностью. Титр вируса __________.
|
Таблица 2. Результаты РСК для идентификации серотипа вируса гриппа.
Результаты: |
Разведения сыворотки |
Контроли |
||||||||||
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
Эритр. |
Комплемента |
Гемолит. системы |
Сыв.А. |
Сыв.Б. |
||
Сыворотка против вируса гриппа А. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Сыворотка против вируса гриппа В. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Выводы: РСК положительная с иммунной/нормальной сывороткой. Титр антител в ____________________ сыворотке _________________________.
|
Таблица 3. Результаты РТГА для идентификации подтипа вируса гриппа.
Результаты: |
Разведения сыворотки |
Контроли |
|||||||||
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
Эритр. |
Вируса |
Сыв.А. |
Сыв.Б. |
||
Сыворотка к вирусу гриппа А1 (H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Сыворотка к вирусу гриппа А3 (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Выводы: РСК положительная с иммунной/нормальной сывороткой. Титр антител в ____________________ сыворотке _________________________.
|
Таблица 4. Схема постановки РТГА для идентификации подтипа вируса гриппа.
Номера пробирок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Контроли |
||
Разведения вируса |
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
Вируса |
Сыв. А1/А3 |
Эритр. |
Изотонич.р-р. NaCl, мл |
- |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
Исследуемый вирус 1:10,мл |
0,5 |
0,5 → |
0,5 → |
0,5 → |
0,5 вылить |
0,5 |
- |
- |
Первый ряд: Сыворотка к вирусу А1 (H1N1) 1:10, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
- |
0,5 |
- |
Второй ряд: Сыворотка к вирусу А3 (H3N2) 1:10,мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
- |
0,5 |
- |
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Результаты: |
||||||||
С сыв.к вирусу гриппа А1(H1N1) |
|
|
|
|
|
|
|
|
С сыв.к вирусу гриппа А3 (H3N2) |
|
|
|
|
|
|
|
|
Выводы: РТГА положительная с сывороткой ____, подтип вируса гриппа _____, в титре ______.
|
Таблица 5. Схема постановки РТГА с парными сыворотками для серологической диагностики гриппа.
Номера пробирок |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
Контроли |
||
Разведения сыв. |
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
Сыв. |
Вируса |
Эритр. |
Изотонич.р-р. NaCl, мл |
- |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
Исследуемая сыворотка 1:10, мл |
0,5 |
0,5 → |
0,5 → |
0,5 → |
0,5 → |
0,5 вылить |
0,5 |
- |
- |
Вирусный диагностикум А1 (А3), 4 АЕ, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
- |
0,5 |
- |
1% суспензия эритроцитов, мл |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Результаты: |
|||||||||
Первая сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Вторая сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Выводы: РТГА положительная с диагностикумом ____________. Титр антител в первой сыворотке __________, во второй сыворотке ___________; ___ - кратное нарастание титра антител во второй сыворотке позволяет/не позволяет подтвердить диагноз гриппа. Грипп вызван вирусом ______________.
|
Таблица 6. Результаты РТГА с парными сыворотками для серологической диагностики гриппа.
Результаты |
Разведения сыворотки |
Контроли |
|||||||||||
1:10 |
1:20 |
1:40 |
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
Вируса А1 |
Вируса А3 |
Эритроц. |
Первой сыв. |
Второй сыв. |
||
Диагностикум А1(H1N1) |
|||||||||||||
Первая сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Вторая сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
||||||
Диагностикум А3 (H3N2) |
|||||||||||||
Первая сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Вторая сыворотка |
|
|
|
|
|
|
|
||||||
Выводы: РТГА положительная с диагностикумом ____________. Титр антител в первой сыворотке __________, во второй сыворотке ___________; ___ - кратное нарастание титра антител во второй сыворотке позволяет/не позволяет подтвердить диагноз гриппа. Грипп вызван вирусом ______________.
|
Рис. 1. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток для идентификации аденовируса.
|
|
|
|
|
|
|
|
Аденовирус + сыворотка 3 |
Аденовирус + сыворотка 4 |
Аденовирус + сыворотка 7 |
Контроли: |
||||
Культ.клеток |
Вируса |
Сыв.3 |
Сыв.4 |
Сыв.7 |
Выводы:
Занятие: ________ Дата:__________
Тема:_______________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________
______________________
______________________
Таблица 7. Схема постановки ИФА
Ингредиенты |
Опыт |
«Положительный контроль» |
«Отриц.Контроль» |
||||||||||||
А1А2 |
B1B2 |
C1C2 |
D1D2 |
E1E2 |
F1F2 |
G1G2 |
H1H2 |
||||||||
1.Буфер А, мл |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
|||||||
Инкубация при комнатной температуре 10 минут |
|||||||||||||||
2.Сыворотка больного, мл |
0,1 |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|||||||
3.Стандартный антиген 100мг/мл, мл |
- |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 вылить |
- |
|||||||
4.Отрицательный контроль, мл |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
0,1 |
|||||||
Инкубация при 37 оС в течение 20 минут |
|||||||||||||||
5.Конъюгат, мл |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
|||||||
Инкубация при 37 оС в течение 20 минут |
|||||||||||||||
6.Субстрат, мл |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
|||||||
Инкубация при комнатной температуре 20 минут |
|||||||||||||||
7. 50% Н2SO4, мл |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
0,05 |
|||||||
Результаты: (отметить цветом) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
Выводы: ИФА ____________________________________ (положительная/отрицательная) Концентрация HBs антигена __________________________ мкг/мл.
|
Рис. 2. Реакция биологической нейтрализации (РБН) в культуре клеток для идентификации полиовируса.
|
|
|
|
|
|
|
|
Полиовирус + сыворотка I |
Полиовирус + сыворотка II |
Полиовирус + сыворотка III |
Контроли: |
||||
Культ.клеток |
Вируса |
Сыв.I |
Сыв.II |
Сыв.III |
Выводы:
Рис.3. РБН в культуре клеток с парными сыворотками для серологической диагностики полиоителита.
Первая сыворотка
|
Вторая сыворотка |
Контроли |
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
Культ. клеток |
Вируса |
Первой Сыворотки |
Второй Сыворотки |
Выводы: