Приготовление серии разведения стандарта

Для построения калибровочного графика необходимо иметь основной стандартный раствор. Стандартные растворы – это растворы со строго определенной концентрацией, значение которой не меняется в зависимости от применяемых методов и оборудования.

Стандартные растворы имеют следующее назначение:

• для построения калибровочных кривых и расчёта концентрации анализируемого вещества методом сравнения;

• для контроля метрологической надежности оборудования (фотометров, эксанов, ФЭК-ов), т.е. позволяют установить, обеспечивает ли данный прибор необходимую линейность метода и точность определения, требуемую для данного анализа;

• для контроля правильности получаемых результатов, т.е. получение достоверной зависимости между содержанием компонента и аналитическим сигналом, а также содержанием компонента в контрольной сыворотке.

Из основного стандартного раствора готовится серия рабочих стандартных растворов.

Рабочие стандартные растворы – это ряд разведенных растворов с пропорционально увеличивающейся концентрацией вещества. Для построения калибровочного графика на оси абсцисс откладывают концентрации рабочих стандартных растворов, а на оси ординат – оптическую плотность рабочих стандартных растворов. Масштаб выбирают так, чтобы калибровочная кривая в системе координат располагалась под углом в 45º.

Практическая часть: Вариант 1.

1. В пробирку поместите 0,5 мл раствора глюкозы, 0,5 мл раствора СuSО₄ и 1 мл 10% раствора NаОН. Нагрейте. Охладите раствор под струёй холодной воды. Пробирку поместите в центрифугу. Получите надосадочную жидкость и определите оптическую плотность этой жидкости на спектрофотометре. Контрольная проба – дистиллированная вода, взятатя в объеме опытной пробы. Сделайте соответствующие рисунки. Вывод.

2. Начертите калибровочную кривую по следующим данным: приготовлены растворы белка: 35, 55, 75, 95, г/л. Растворы профотометрированы и получены показатели экстинций соответственно: 0,05; 0,07; 0,085; 0,1. Определите количество белка по построенному графику при показателе экстиции 0,075.

Вариант 2.

1. В центрифужную пробирку поместите 0,2 мл лошадиной сыворотки, добавьте 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Пробирку поместите в центрифугу. Получите надосадочную жидкость и определите оптическую плотность этой жидкости на спектрофотометре. Контрольная проба – дистиллированная вода, взятатя в объеме опытной пробы. Сделайте соответствующие рисунки. Вывод.

2. Начертите калибровочную кривую по следующим данным: приготовлены растворы пирувата натрия: 0,05; 0,10; 0,15; 0,2; 0,25 мкмоль. Растворы профотометрированы и получены показатели экстинций соответственно: 0,09; 0,21; 0,29; 0,35; 0,4. Определите количество пирувата натрия по построенному графику при показателе экстиции 0,25