Лабораторные исследования
Исследование изменения активности амилазы.
Определение степени активности амилазы слюны.
(Определенное количество крахмала, расщепляемое 1мл слюны за определённый промежуток времени (30мин)).
Цель работы: выяснить закономерность изменения активности амилазы в период применения биологически активной добавки Биокурунг.
Гипотеза: активность амилазы будет возрастать в течение времени приема препарата пропорционально возростанию рН слюны.
Приборы и материалы:
1)10 пробирок
2)1 штатив для пробирок
3)1% крахмальный клейстер
4)йод
5)слюна
6)дистиллированная вода
Для определения степени активности амилазы:
1. Налили из пипетки в десять пронумерованных пробирок по 1 мл дистиллированной воды.
2. Добавили в первую пробирку с помощью пипетки 1 мл слюны, разведенной в 10 раз водой.
3. Перемешали содержимое первой пробирки при помощи троекратного втягивания пипеткой жидкости из пробирки и последующего выливания из пипетки, а затем переносим 1 мл полученной смеси из первой пробирки во вторую.
4. Перемешали таким же образом содержимое второй пробирки и перенесли 1мл полученной смеси из второй пробирки в третью и т. д. Из десятой пробирки 1 мл жидкости как излишний вылили и в итоге получили различное разведение фермента: каждая последующая пробирка содержит фермента в два раза меньше, чем предыдущая пробирка.
5. Налили во все десять пробирок еще по 1 мл дистиллированной воды.
6. Далее, налили из пипетки во все десять пробирок (начиная с десятой, потом в девятую и т.д.) по 2 мл 0,1 % раствора крахмала и перемешали содержимое каждой пробирки.
7. Одновременно поместили все десять пробирок в нагретую до 37º водяную баню.
8. Через 30 минут вынули пробирки из бани, быстро охладили их током холодной воды, перемешали содержимое каждой пробирки и поставили по порядку в штатив.
9. Налили в каждую пробирку по две капли раствора йода, перемешали и наблюдали в пробирках гамму цветов от желтого цвета к синему. Желтый цвет свидетельствует об отсутствии крахмала, красноватый – о присутствии промежуточных продуктов расщепления – декстринов, синий – о присутствии крахмала или продуктов его начального расщепления.
10. Вычислили амилазную активность исследуемой слюны. При этом исходили из следующего. В пробирке, где жидкость окрашена еще в синий цвет, должного расщепления крахмала не произошло. Достаточное расщепление крахмала, очевидно, имеет место в той пробирке, где нет синего оттенка. Пусть, например, это будет пятая пробирка (в шестой пробирке уже имеется синий оттенок). В пятой пробирке неразведенной слюны было 1/320 мл, т.е. мы можем написать:
1/320 мл слюны расщепляет 2 мл 0,1% раствора крахмала
1 ---------------------------------Х мл 0,1 мл
т. е. Х = 2 • 1 / 1/320 = 640.
Таким образом, 1 мл неразбавленной слюны расщепляет за 30 минут при температуре 37º 640 мл 0,1% раствора крахмала.
Таблица для оценки активности амилазы.
|
№ пробирки |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
|
Разведение слюны |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
1/320 |
1/640 |
1/1280 |
1/2560 |
1/5120 |
1/10240 |
Мы провели данный опыт, определили степень активности амилазы у разных людей на разных этапах применения препарата Биокурунг. И составили статистику для 4-х недель применения препарата.
Амилаза до начала приема препарата Биокурунг:
Амилаза через неделю после начала эксперимента:
Амилаза через 2 недели после начала эксперимента:
Амилаза через 3 недели после начала эксперимента:
Амилаза через 4 недели после начала эксперимента:
Результаты наших исследований приведены на графике:
Из графика видно, что в течение времени использования препарата «биокурунг» активность амилазы возрастала со средних значений 2,6 до средних значений 4,88. Мы связываем этот рост активности с ростом рН слюны, т.к. амилаза лучшевсего работает именно в щелочной среде. Нормализация рН слюны сказалась не толькло на этом ферменте, наши исследуемые резко перестали болеть через некоторое время применения препарата, что свидетельствует о повышении активноси лизоцима. Связь активности амилазы со значением рН приведена в таблице:
Красным представлен коэффициент активности амилазы, а синим рН
Вывод: активность амилазы повышается в течение периода использования препарата Биокурунг до определенного предела.
Итог исследования: мы выявили, что активность амилазы повышается в течение времени приема препарата «Биокурунг» пропорционально повышению рН слюны. Предоложительно это происходит из-за нормализации кислотности крови, что является следствием положительного действия лакто- и бифидобактерий на выработку соляной кислоты в желудке.