2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Санитарно_бактериологический_контроль_и_микробиологические_методы
.pdf11
сгиб ательными изменениями клеток. Под клеточной стенкой сп ирохет находится аксиальная нить (аксистиль), которая как б ы закру чивается вокру г п ротоп лазматического цилиндра сп ирохеты, п ридавая ей винтооб разну ю ф орму (п ервичные завитки сп ирохет). А ксиальная нить состоитиз ф иб рилланалоговж гу тиковб актерий и п редставляетсоб ой сократительный б елок ф лагеллин. Ф иб риллы у частву ю т вп ередвиж ении
сп ирохет, |
п ридаваяклеткам вращ ательное, сгиб ательноеи п осту п ательное |
|
движ ение. |
При этом сп ирохеты об разу ю тп етли, завитки, изгиб ы, которые |
|
названы |
вторичными |
завитками. Сп ирохеты п лохо восп ринимаю т |
красители. О б ычно их |
окраш иваю т п о методу Романовского-Гимзы или |
сереб рением. В ж ивом видеих исследу ю тс п омощ ью ф азово-контрастной
илитемноп ольной микроскоп ии. |
|
|
|
Сп ирохеты п редставлены |
3 |
родами, п атогенными для человека: |
|
Тrер о пет а , |
Во rrеliа , Lер tо sр irа . |
Патогенными п редставителями рода |
|
Тrер о пет а |
являю тся Т.р а llidит |
- |
возб у дитель сиф илисаи Т.р еrtепие - |
возб у дитель троп ической б олезни - ф рамб езии. И мею тся и сап роф иты - об итатели п олости ртаи илаводоемов.
В озб у дитель возвратного тиф а В.rесиrrепti является п атогенным п редставителем рода Во rrеliа . Патогенный п редставитель L.iпtеrrо gа пs вызывает леп тосп ироз. Патогенные леп тосп иры п оп адаю т ворганизм с водой или п ищ ей, п риводя к развитию кровоизлияний и ж елту хи. Сап роф итныеп редставителиоб итаю твводе.
4. Р иккет сии - мелкиеграмотрицательныеп алочковидныеб актерии размером 0,35 - 2,0 мкм, об лигатныевну триклеточныеп аразиты. О б итаю т вчленистоногих, которые являю тся их хозяевами или п ереносчиками. Своеназваниериккетсии п олу чили вчесть Х .Т .Риккетсаамериканского у ченого, вп ервые оп исавш его одного из возб у дителей (п ятнистая лихорадкаСкалистых гор). Ф ормаи размер риккетсии могу т меняться
(клетки неп равильной ф ормы, |
нитевидные) |
взависимости от у словий |
||||
роста. Риккетсии, как и б ольш инство б актерий, |
размнож аю тсяб инарным |
|||||
делением. Стру кту ра риккетсии |
не |
отличается |
от |
таковой |
||
грамотрицательных б актерий. |
Больш инство |
риккетсий |
не |
мож ет |
||
развиваться вне ж ивой клетки, |
их |
выращ иваю т в ж елточных |
меш ках |
ку риногоэмб риона, п ереж иваю щ их ку льту рах клеток и тканях ж ивотного. Риккетсии об ладаю т независимым от клетки хозяина метаб олизмом, однако, возмож но, они п олу чаю т от клетки-хозяина макроэргические соединениядлясвоегоразмнож ения. В мазках и тканях их окраш иваю тп о методу Романовского-Гимзы или п оЗдродовскому . У человекариккетсии
вызываю т |
эп идемический |
сып ной тиф , |
К у -лихорадку , |
клещ евой |
|
риккетсиоз, лихорадкv цу цу гаму ш и, п ятнисту ю лихорадку |
Скалистых гор |
||||
и др. |
|
|
|
|
|
5. |
Х л а мид ии, или |
гальп ровии, |
относятся |
к |
об лигатным |
вну триклеточным кокковидным грамотрицательным б актериям. Геном хламидий содерж итв4 разаменьш егенетической инф ормации, чем геном киш ечной п алочки. Х ламидии размнож аю тсятольковж ивых клетках: их
12
рассматриваю т как энергетических п аразитов. По-видимому , у хламидий отсу тству ет система регенерации А Т Ф . В не клеток хламидии имею т сф ерическу ю ф орму (0,3 мкм), являясь элементарными тельцами. В ну три клеток они п ревращ аю тся в делящ иеся ретику лярные тельца, об разу я
скоп ления |
(вклю чения). У |
человека хламидии вызываю т такие |
|||
заб олевания, |
как |
трахому , |
орнитоз, |
п невмонии, |
п ораж ения |
урогенитальноготрактаидр.
6.М ико пл а змы - мелкиеб актерии, окру ж енныецитоп лазматической мемб раной и не имею щ ие клеточной стенки. О ни относятся к отделу
тенерику тов, |
классу |
М о lliсиtеs |
(«мягкокож ие» ). |
И з-за |
отсу тствия |
клеточной стенки микоп лазмы |
осмотически чу вствительны |
и имею т |
|||
разнооб разну ю |
ф орму : |
кокковидну ю , нитевидну ю , |
колб овидну ю . Э ти |
||
ф ормы видны |
п ри ф азово-контрастной микроскоп ии чистых ку льту р |
микоп лазм. Н ап лотнойп итательнойсредемикоп лазмы об разу ю тколонии, нап оминаю щ ие яичницу -глазу нью : неп розрачная центральная часть, п огру ж енная в среду , и п росвечиваю щ ая п ериф ерия в виде кру га. Патогенные микоп лазмы вызываю т хронические инф екции, нап ример, М усо р lа sт а р пеит о пiа евызываету человеказаб олевание, п ротекаю щ ееп о
тип у |
острой |
респ ираторной |
инф екции. |
|
М икоп лазмы |
вызываю т |
||||||
заб олевания не только у |
ж ивотных, |
но и растений. Д остаточно ш ироко |
||||||||||
расп ространены и неп атогенныеп редставители. |
|
|
|
|||||||||
7. |
Акт ино мицет ы |
- |
ветвящ иеся грамп олож ительные б актерии. |
|||||||||
А ктиномицеты, |
как |
и |
гриб ы, |
об разу ю т |
мицел ий - нитевидные |
|||||||
п ереп летаю щ иеся клетки |
(гиф ы). |
|
О б щ у ю |
ф илогенетическу ю ветвь с |
||||||||
актиномицетами |
об разу ю т так |
|
называемые |
но ка р д ио по д о бны е |
||||||||
(нокардиоф ормные) |
актиномицеты |
- |
|
соб ирательная |
гру п п а |
|||||||
п алочковидных, |
неп равильной |
ф ормы |
б актерий. |
И х |
отдельные |
|||||||
п редставители об разу ю т ветвящ иеся ф ормы. |
К ним |
относят б актерии |
родовСо rупеbа сtеriит , М усо bа сtеriит , Nо са rdiа и др. Н окардиоп одоб ные актиномицеты отличаю тся наличием в клеточной стенке сахаров араб инозы, галактозы, атакж е миколовых кислот и б ольш их количеств
ж ирных |
кислот. М иколовые кислоты и лип иды клеточных стенок |
|
об у словливаю т кислотоу стойчивость б актерий, |
вчастности п атогенных |
|
микоб актерий. Патогенные актиномицеты |
вызываю т актиномикоз, |
|
нокардии |
- нокардиоз, микоб актерии - ту б ерку лез, коринеб актерии - |
диф терию . |
|
Сап роф итные ф ормы актиномицетов |
и нокардиеп одоб ных |
актиномицетовш ироко расп ространены вп очве, |
многиеиз них являю тся |
п роду центами антиб иотиков. |
|
За д а нuя д л я вы nо л ненuя л а бо р а т о р но йр а бо т ы
1. О п ределить ф орму клеток неизвестной б актериальной ку льту ры, исп ользу яп ростойметодокраски.
2. О п ределить ф орму клеток иотнош ениек окраскеп оГраму разных б актерий, содерж ащ ихсявисследу емойсмеси б актериальных ку льту р.
13
3. О п ределить наличиесп ор, зерен волю тинаи кислотоу стойчивость
исследу емой |
б актериальной |
ку льту ры, |
исп ользу я |
соответству ю щ ие |
|||||
методы окраски. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
4. |
Составить п ротокол |
и сделать |
заклю чение п о резу льтатам |
||||||
п роведенных исследований (таб л. 1). |
|
|
|
||||||
Т аблица |
1. Х арактеристика ку льту ры п о морф ологическим и |
||||||||
тинкториальным п ризнакам (ф ормап ротокола) |
|
|
|||||||
Ф орма |
О краска |
Н аличие |
|
|
К ислото- |
|
Подвиж ность |
||
клеток |
п о |
|
сп ор |
кап су л |
зерен |
|
у стойчивость |
|
|
|
Граму |
|
|
|
волю тина |
|
|
|
|
М |
ет о д ическиеука за ния |
|
|
|
|
|
|||
Д ля изу чения морф ологии б актерий из ниx |
готовят нативные |
(п риж изненные) п реп араты и ф иксированныемазки, которыеокраш иваю т анилиновыми красителями. В основеокраски леж атслож ныеxимические и ф изико-xимические реакции. Ц итоп лазма б актерий, особ енно в
фиксированныx мазкаx, об ладает сродством к основным красителям, вследствиечего окраску п роводятметиленовым синим, кристаллическим
фиолетовым, везу вином идр.
Д ля выявления различныx стру кту р б актериальной |
клетки |
п рименяю тнейтральныеи кислыекрасители. |
|
Различаю т п ростые и слож ные методы окраски. |
Простые |
заклю чаю тсявокраскеп реп аратаодним красителем; слож ныеметоды (п о Граму , Ц илю -Н ильсену и др.) вклю чаю тп оследовательноеисп ользование несколькиx красителей и имею т диф ф еренциально-диагностическое значение. О тнош ение микроорганизмовк красителям расцениваю т как
тинкториальные свойства. |
Су щ еству ю т сп ециальные методы |
окраски, |
||||||||
которые исп ользу ю т для |
выявления |
ж гу тиков, |
клеточной |
стенки, |
||||||
ну клеоидаи разныx цитоп лазматическиx вклю чений. |
|
|
|
|
||||||
|
П р иго т о вл ениепр епа р а т о в д л я микр о ско пическо го иссл ед о ва ния |
|
|
|||||||
|
Д ля п риготовления п реп арата исследу емый |
материал б еру т из |
||||||||
п роб ирки, колб ы или |
чаш ки |
Петри б актериологический п етлей или |
||||||||
стерильной п ип еткой. В |
некоторыx |
слу чаяx исп ользу ю т для этой цели |
||||||||
п реп аровальныеиглы. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
П р иго т о вл ение пр епа р а т о в |
д л я |
изучения |
микр о р га низмо в |
в |
|||||
на т ивно м вид е |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
М ет о д « висячей» ка пл и. |
Преп арат готовят нап окровном стекле, |
в |
|||||||
центр которого наносят одну |
кап лю |
б актериальной ку льту ры, затем |
п редметно стекло с лу нкой, края которой п редварительно смазываю т вазелином, п риж имаю тк п окровному стеклу так, чтоб ы кап лянаходилась вцентрелу нки. Быстрым движ ением п ереворачиваю тп реп аратп окровным стеклом вверх. В п равильно п риготовленном п реп арате кап ля долж на своб одновисеть надлу нкой, некасаясь ееднаили края. Д лямикроскоп ии вначалеисп ользу ю тмалый су xой об ъ ектив8X, п оду величением которого наxодят край кап ли, азатем у станавливаю т об ъ ектив40X и исследу ю т п реп арат.
|
|
14 |
|
|
М ет о д |
« р а зд а вл енно й» |
ка пл и. |
Н а п оверхность |
об езж иренного |
п редметного |
стекла наносят |
кап лю |
исследу емого |
материала или |
су сп еп зию б актерий и п окрываю т ее п окровным стеклом. К ап ля долж на б ыть неб ольш ой, не выходящ ей за край п окровного стекла.
Микроскоп иру ю тп реп аратс об ъ ективом 40X.
Пр иж изненна я (вит а л ьна я) о кр а ска . В звесь микроорганизмоввносят вкап лю 0,001% раствораметиленовогосинегоилинейтральногокрасного.
Затем готовят п реп арат «висячая» или «раздавленная» кап ля и микроскоп иру ю т. После микроскоп ии п реп араты «раздавленной» или «висячей» кап ли оп у скаю твдезинф ициру ю щ ий раствор.
П р иго т о вл ениефиксир о ва нны x пр епа р а т о в-ма зко в
Д ля п риготовления п реп аратанаоб езж иренное п редметное стекло
наносят кап лю |
воды или изотонического раствора хлориданатрия, в |
||
котору ю |
п етлей вносятисследу емый материали расп ределяю тего таким |
||
об разом, |
чтоб ы |
п олу чить тонкий и равномерный мазок. При таком |
|
расп ределении |
материала в мазке п ри |
микроскоп ии мож но у видеть |
|
изолированные |
б актериальные клетки. |
Е сли исследу емый материал |
содерж ится вж идкой среде, то его неп осредственно наносят п етлей на п редметноестекло и готовятмазок. М азки высу ш иваю тнавозду хеили в стру етеп логовозду ханадп ламенем горелки, недаваякап лезакип ать.
Д ля ф иксации мазкап редметное стекло (мазком вверх) медленно п роводят 3 разачерез п ламя горелки. М икроорганизмы п ри ф иксации п огиб аю т, п лотноп рикреп ляясь к п оверхностистекла, и несмываю тсяп ри дальнейш ейоб раб отке. Прогретыемикроорганизмы б олеевосп риимчивы к
красителю , |
но б олее длительное нагревание мож ет вызвать деф ормации |
|
клеточных стру кту р. М |
азки крови, мазки-отп ечатки органови тканей и в |
|
некоторых |
слу чаях |
мазки из ку льту р микроорганизмов ф иксиру ю т |
п огру ж ением на5 - |
20 мин. вметиловый или этиловый сп ирт, смесь |
Никиф орова, су лемовый сп иртили дру гиеф иксиру ю щ иеж идкости.
Мет о д ы о кр а ски ма зко в
П р о ст о й мет о д . Ф иксированный мазок окрасить каким-либ оодним
красителем, |
нап ример ф у ксином водным (1 - 2 |
мин.) или метиленовым |
синим (3 - 5 |
мин.), п ромыть водой, высу ш ить имикроскоп ировать. |
|
Сл о ж ны е мет о д ы . Последовательно |
нанести на п реп арат |
оп ределенныекрасители, различаю щ иесяп охимическому составу и цвету ,
п ротравы, сп ирты, |
кислоту и др. Э то п озволяет выявить оп ределенные |
|
стру кту ры клеток |
и диф ф еренцировать одни виды микроорганизмовот |
|
дру гих. |
|
|
О кр а ска по мет о д уГр а ма |
|
|
1. Н а ф иксированный мазок |
нанести карб олово-сп иртовой раствор |
генциановогоф иолетовогочерез п олоску ф ильтровальнойб у маги. Ч ерез 1- 2 мин. ееснять, акраситель слить.
2.Н анестираствор Л ю голяна1-2 мин.
3.О б есцветить этиловым сп иртом втечение 30-60 сек. до п рекращ ения отхож денияф иолетовыx стру ек красителя.
15
4.Промыть водой.
5.Д окрасить водным раствором ф у ксинавтечение 1-2 мин., п ромыть водой, высу ш ить и микроскоп ировать.
Грамп олож ительные б актерии окраш иваю тся втемно-ф иолетовый цвет, грамотрицательныевкрасный.
О тнош ение б актерий к окраске п о Граму оп ределяется их сп особ ностью у держ ивать об разовавш ийся вп роцессе окраски комп лекс
генцианового-ф иолетового |
с |
йодом. Э то зависит от различий в |
||||
химическом |
составе |
|
и |
п роницаемости |
клеточной |
стенки |
грамп олож ительныx |
и |
|
грамотрицательных |
б актерий. |
У |
грамп олож ительных б актерий п еп тидогликан многослоен, с ним связаны
тейхоевые |
кислоты. |
У |
грамотрицательных |
б актерий п еп тидогликан |
||
однослоен, |
имеется |
нару ж ная мемб рана, в состав которой входят |
||||
ф осф олип иды, |
лип оп ротеиды, б елки и слож ный лип оп олисахарид (Л ПС). |
|||||
В сю нару ж ну ю |
мемб рану |
п ронизываю т б елки-п орины, об есп ечиваю щ ие |
||||
диф ф у зию |
различных соединений. Т аким об разом, у |
грамп олож ительных |
||||
б актерий |
создаю тся |
оп тимальные у словия |
для |
п рочной ф иксации |
красителяирезистентности к об есцвечиванию сп иртом.
О краскап о Граму имеетваж ноедиф ф еренциально-диагностическое значениеи ш ирокоисп ользу етсявмикроб иологии. К грамп олож ительным
б актериям |
относятся |
стаф илококки, |
стреп тококки, |
коринеб актерии |
||||
диф терии, |
микоб актерии |
ту б ерку леза и др., |
к |
грамотрицательным - |
||||
гонококки, |
менингококки, |
киш ечная п алочка и |
др. |
Н екоторые виды |
||||
б актерий могу т окраш иваться п о Граму |
вариаб ельно взависимости от |
|||||||
возраста, |
особ енностей |
ку льтивирования |
и |
дру гих |
ф акторов, |
|||
воздейству ю щ их настру кту ру клеточной стенки. |
|
|
|
|||||
О сновная ош иб ка, доп у скаемая п ри окраске п о Граму , |
состоит в |
|||||||
«п ереоб есцвечивании» |
мазка этиловым |
сп иртом. |
Грамп олож ительные |
|||||
б актерии |
п ри этом |
могу т у трачивать |
п ервоначальну ю |
окраску |
генциановым ф иолетовым и п риоб ретать красный цвет(характерный для грамотрицательных б актерий) врезу льтатеп оследу ю щ ей докраски мазка ф у ксином. Грамотрицательныеб актерии всвою очередь могу тсохранять сине-ф иолетовый цвет генцианового ф иолетового. Д ля п равильной окраски следу етстрогособ лю дать технику об есцвечивания.
О кр а ска кисл о т о уст о йчивы х ба кт ер ийпо мет о д уЦил я - Н ил ьсена
1. Н аф иксированный мазок нанести карб оловый раствор ф у ксиначерез п олоску ф ильтровальнойб у магиип одогреть доп оявленияп ароввтечение
3-5 мин.
2.Снять б у магу , п ромыть мазок водой.
3.Н анести 5 % раствор серной кислоты или 3 % раствор смеси сп иртас хлороводороднойкислотой на1 - 2 мин. дляоб есцвечивания.
4.Промыть водой.
5.Д окрасить мазок водным раствором метиленовогосинеговтечение3 - 5 мин.
6.Промыть водой, высу ш ить имикроскоп ировать.
16
К ислотоу стойчивость об у словленаналичием вклеточной стенке и цитоп лазме б актерий п овыш енного количества лип идов, воска и оксикислот, вчастности миколовой кислоты. Раствор карб оловой кислоты разрыхляетклеточну ю стенку и тем самым п овыш аетеетинкториальные свойства, авысокая концентрация красителя и нагревание вп роцессе окраски у силиваю треакцию взаимодействиякрасителяс б актериальными клетками, которыеокраш иваю тсяп ри этом вкрасный цвет. При об раб отке п реп арата серной кислотой некислотоу стойчивые б актерии об есцвечиваю тся и окраш иваю тся метиленовым синим вголу б ой цвет, а кислотоу стойчивыеб актерии остаю тсяокраш енными ф у ксином вкрасный цвет.
Окр а ска зер енво л ют ина по мет о д уН ейссер а
1.Н аф иксированный мазок нанести ацетатсиньки Н ейссерана2 - 3 мин.
2.Д об авить раствор Л ю голяна10 – 30 сек.
3.Промыть п реп аратводой.
4.М азок докрасить водным раствором везу винаили хрезоидинавтечение
0,5 - l мин.
5.Промыть п реп аратводой, высу ш ить имикроскоп ировать.
Зерна волю тина п редставляю т соб ой |
соединения, |
имею щ ие в |
||
отличие от цитоп лазмы щ елочну ю |
реакцию , |
и п оэтому |
изб ирательно |
|
восп ринимаю т ацетат |
синьки, окраш иваясь в темно-синий цвет. |
|||
Ц итоп лазма клетки, |
об ладаю щ ая |
кислой |
реакцией, |
восп ринимает |
щелочнойкраситель везу вин и окраш иваетсявж елтый цвет.
Обна р уж ениека псул по мет о д уБ ур р и-Гинса
1.Смеш ать кап лю взвеси микроб ных клеток с кап лей ту ш и и п ри п омощ и стекласош лиф овальным краем сделать мазок таким ж еоб разом, как мазок из крови, высу ш ить и ф иксировать.
2.Н амазок нанести водный раствор ф у ксинана1 - 2 мин.
3.Промыть водой, высу ш ить навозду хе и микроскоп ировать. Бактерии окраш иваю тся в красный цвет, а неокраш енные кап су лы контрастно выделяю тсяначерно-розовом ф оне.
Окр а ска спо р микр о бо в
Плотная об олочкасп ор, неп роницаемая для воды, окраш ивается с б ольш им тру дом, п оэтому п ри об ычных методах окраски сп оры имею твид неокраш енных п у стот вну три клетки. Д ля окраски сп ор п ользу ю тся сп ециальными методами с п рименением п ротрав(кислоты или щ елочи).
Протравы разрыхляю т об олочку сп оры, |
об легчая п роникновение внее |
|||
красителя. О красивш иеся |
сп оры об ладаю т кислотоу стойчивостью |
в |
||
отличие от вегетативного теламикроб ной клетки, |
об есцвечиваю щ егося |
|||
п од действием кислоты. |
Поэтому |
п ринцип |
окраски сп ор |
и |
кислотоу стойчивых б актерий одинаков: |
п реп арат окраш иваю т основным |
красителем, затем об есцвечиваю ткислотойидокраш иваю тдоп олнительно вкакой-ниб у дь контрастный цвет.
17
О кр а ска спо р по мет о д уО ж ешки
1.Н анеф иксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислоты (Н Сl) и п одогреть нап ламени втечение2 - 3 мин.
2.К ислоту слить, п реп аратп ромыть водой, п росу ш ить и ф иксировать над п ламенем. Затем окрасить п ометоду Ц иля-Н ильсена.
Сп оры б актерий п риоб ретаю ткрасный цвет, авегетативныеф ормы – синий.
О кр а ска спо р по мет о д уШ еффер а и Ф ул т о на
1.Н аф иксированный мазок нанести 5 % раствор малахитовогозеленогои
3- 4 разанагреть доп оявленияп аров.
2.Промыть водой.
3.Д окрасить 0,5 % саф ранинавтечение30 сек.
4.Промыть водой.
Сп оры б актерий окраш иваю тсявзеленый цвет, вегетативныеклетки
– вкрасный.
Т ем а 3. М И К РО БИ О Л О ГИ Ч Е СК И Е М Е Т О Д Ы И ССЛ Е Д О В А Н И Я
ПИ Т А Т Е Л ЬН Ы Е СРЕ Д Ы Питательной средой вмикроб иологии называю тсреды, содерж ащ ие
различные соединения слож ного или п ростого состава, которые п рименяю тся для размнож ения б актерий или дру гих микроорганизмовв лаб ораторных илип ромыш ленных у словиях.
Л ю б аяп итательнаясредадолж наотвечать следу ю щ им треб ованиям: содерж ать всенеоб ходимыедляразмнож ениямикроорганизмоввещ ества
влегкоу свояемой ф орме, иметь оп тимальные влаж ность, |
вязкость, рН , |
б ыть изотоничной и п о возмож ности п розрачной. К аж ду ю |
п итательну ю |
среду стерилизу ю топ ределенным сп особ ом взависимости отеесостава. Среды различаю тся:
по ко нсист енции - п лотные, п олу ж идкиеи ж идкие; О сновой п лотной п итательной среды являю тся гелеоб разные
вещ ества: агар-агар (2 - 3%), ж елатин (10 - 15%), которые доб авляю т к
ж идким п итательным средам, нап ример, к |
мясоп еп тонному |
б у льону |
(М ПБ), п олу чаятаким об разом мясоп еп тонный агар (М ПА ). |
|
|
по со ст а ву- п ростые, слож ные; |
|
|
Простые п итательные среды п рименяю т для выращ ивания многих |
||
б актерий. Э то гидролизаты мясных, рыб ных п роду ктов, крови ж ивотных |
||
или казеина, из которых готовят ж идку ю |
п итательну ю |
среду – |
п итательный б у льон, |
и п лотну ю |
– п итательный |
агар. |
Слож ные |
|
п итательные среды вклю чаю т доп олнительные комп оненты - |
сыворотку |
||||
крови (сывороточный |
агар), кровь |
(кровяной агар), сахар (сахарный |
|||
б у льон). |
Н ап ример, |
на кровяном |
агаре б актерии, |
п роду циру ю щ ие |
|
гемолизин, об разу ю тколонии с зонойгемолиза. |
|
|
|||
по |
ист о чнику – |
естественные, |
синтетические (иску сственные) и |
||
п олу синтетические; |
|
|
|
|
18
по на зна чению – об щ егоназначения(у ниверсальные) и сп ециальные. Ср ед ы о бщ его на зна чения исп ользу ю т для выращ ивания многих п атогенных микроб ови п рименяю твкачествеосновы дляп риготовления
сп ециальных сред, доб авляя к ним кровь, сахара, молоко, сыворотку и дру гиеингредиенты, необ ходимыедляростатогоилииноговидамикроб а.
К ним |
относятся мясоп еп тонные среды: |
агар, б у льон, п итательный |
||
ж елатин. |
|
|
|
|
Гр уппа специа л ьны х |
ср ед вклю чает: |
элективные, |
ингиб иторные, |
|
диф ф еренциально-диагностическиеп итательныесреды. |
|
|||
Эл ект ивны е (избир а т ел ьны е) и ингибит о р ны е ср ед ы содерж ат в |
||||
своем |
составе вещ ества, |
об есп ечиваю щ ие наиб олее |
б лагоп риятные |
у словия для выращ ивания одного или нескольких видовмикроб ов. При п осевенаних материала, содерж ащ егосмесь различных микроорганизмов, раньш евсегоб у детп роявлятьсяросттоговида, длякоторогоданнаясреда
бу детэлективной. При создании элективных п итательных средисходятиз
биологических особ енностей, которыеотличаю тданныемикроорганизмы от б ольш инствадру гих. Н ап ример, изб ирательный рост стаф илококков наб лю дается п ри п овыш енной концентрации хлориданатрия, холерного виб рионавщ елочной среде и т. д. И нгиб иторные п итательные среды
наш ли ш ирокое п рименение п ри |
б актериологическом |
исследовании |
||||||||
материалов, |
содерж ащ их |
об ильну ю |
и |
разнооб разну ю |
микроф лору , |
|||||
нап ример, |
п ри исследовании об ъ ектов внеш ней среды |
(п очвы, |
воды, |
|||||||
возду ха), |
п ри исследовании кала на содерж ание в нем |
возб у дителей |
||||||||
киш ечных |
инф екций. |
Приготовление ингиб иторных сред основано на |
||||||||
п рименении ж изненно необ ходимых |
вещ еств, ассимилиру емых |
только |
||||||||
выращ иваемым видом |
микроорганизма, |
или |
вещ еств, |
изб ирательно |
||||||
п одавляю щ их развитиесоп у тству ю щ еймикроф лоры. |
|
|
||||||||
Диффер енциа л ьно -д иа гно ст ические |
пит а т ел ьны е |
ср ед ы |
||||||||
п рименяю тся |
для |
разграничения |
отдельных |
видов |
(или |
гру п п ) |
||||
микроорганизмов. Принцип |
п остроения этих сред основан натом, что |
|||||||||
разные виды |
б актерий |
различаю тся меж ду соб ой п о б иохимической |
активностивследствиенеодинаковогонаб ораф ерментов. Ростб актерийна диф ф еренциально-диагностических средах соп ровож дается изменением цвета колоний, п роисходящ им п од действием ф ерментов микроб ной
клетки. |
|
|
|
По |
своему |
назначению |
диф ф еренциально-диагностические |
п итательныесреды мож норазделить наследу ю щ иегру п п ы: |
|||
1. Среды |
для выявления п ротеолитической сп особ ности микроб ов, |
содерж ащ иевсвоем составеб елковыевещ ества: кровь, молоко, ж елатин, сверну ту ю кровяну ю сыворотку и т. д.
2. |
Среды |
с сахарами, многоатомными сп иртами для об нару ж ения |
соответству ю щ их ф ерментов, расщ еп ляю щ их эти сахараи сп ирты. |
||
3. |
Среды |
для оп ределения реду циру ю щ ей сп особ ности микроб ов, |
содерж ащ ие в своем составе химические вещ ества, изменяю щ иеся в окраске б лагодаря окислительному или восстановительному действию
19 |
|
б актерий. Т акими красками являю тся: |
нейтральная красная, метиленовая |
синь, лакму совая настойка, кислый |
ф у ксин, б ромтимолб лау, водная |
голу б аяи розоловаякислота(В Р). |
|
4. Среды с индиф ф ерентными химическими вещ ествами, которыеслу ж ат источником п итаниядляодних видовмикроб ови неу сваиваю тсядру гими видами. Н ап ример, среды с солями лимонной кислоты для выявления разновидности киш ечной п алочки, сп особ ной у сваивать у глерод из молеку ллимонной кислоты.
Д иф ф еренциально-диагностические среды ш ироко исп ользу ю тся в лаб ораторных микроб иологических диагностических исследованиях для диф ф еренциации и идентиф икации б актерий.
|
ПРИ ГО Т О В Л Е Н И Е ПИ Т А Т Е Л ЬН Ы Х СРЕ Д |
||
|
О сно вны еср ед ы |
|
В ып у скается всу хом виде и содерж ит, г/л, |
|
П ит а т ел ьны й бул ьо н. |
||
гидролизат кильки - 10,05; |
натрия хлорид - 4,95. Н авеску п орош ка, |
у казанну ю наэтикетке(нап ример, 15 г), тщ ательноразмеш иваю твколб ес 1 лдистиллированной воды. К ип ятят1 - 2 мин., недоп у скаяп ригорания, ф ильтру ю тчерез б у маж ный ф ильтр и разливаю твп роб ирки или колб ы.
Стерилизу ю тп ри темп ерату ре120 °Свтечение20 мин.
П ит а т ел ьны й а га р . Состав, г/л: ф ерментативный гидролизат кормовых дрож ж ей - 12,0; агар - 12,5; натрияхлорид - 5,5; рН 7,34. 30 г п орош каразмеш иваю тв1 лдистиллированной воды, кип ятятдоп олного расп лавления агара (2 - 3 мин.), ф ильтру ю т через ватный ф ильтр и
стерилизу ю тп ри темп ерату ре120 °С втечение20 мин. Затем разливаю т п итательный агар в стерильные чаш ки Петри. Д ля п риготовления скош енного п итательного агарап роб ирки с разлитым агаром оставляю т застывать внаклонном п олож ении настоле.
Кр о вяны е, сы во р о т о чны еи а сцит ическиеср ед ы . К расп лавленному
и осту ж енному до45 - 50 °Сп итательному агару асеп тически доб авляю т510 % деф иб ринированной крови или такое ж е количество сыворотки крови, или 25 % асцитической ж идкости, хорош о п еремеш иваю ти сразу ж еразливаю твчаш ки Петри, п роб ирки или дру гу ю лаб ораторну ю п осу ду . Д ля п риготовления ж идкой среды такие ж е количествасыворотки или
асцитическойж идкостидоб авляю тк п итательному б у льону . |
|
|
Ср ед ы |
с угл ево д а ми. К п итательному агару или б у льону |
доб авляю т |
0,5 - 1 % |
глю козы или дру гого у глевода. Стерилизацию |
п роизводят |
теку чим п аром или п аром п оддавлением 0,5 атм.
Эл ект ивны епит а т ел ьны еср ед ы П епт о нна я во д а 1 %, рН 8,0. И зб ирательнадляхолерноговиб риона,
который размнож ается б ыстро, оп ереж ая рост дру гих микроорганизмов. Щ елочная реакция среды не п реп ятству ет росту холерных виб рионов, тормозитростдру гих микроорганизмов.
Щ ел о чно й а га р (п лотная среда): п итательный агар, рН 7,8, аналогичноп редыду щ ейсредеэлективендляхолерноговиб риона.
20
Ср ед а Л еффл ер а . Смесь 1 части лош адиной сыворотки и 3 частей сахарного б у льона. Среда элективна для коринеб актерий диф терии. Быстрый ростэтих микроорганизмов(4 - 6 ч) об есп ечиваетэлективность
среды. |
|
|
|
Ж |
ел т о чно -со л ево й а га р |
(Ж СА). |
Содерж ит п овыш енные |
концентрации хлорида натрия (8 |
- 10 %), |
которые не п реп ятству ю т |
размнож ению стаф илококков, что об есп ечиваетэлективность этой среды для данных микроорганизмов. В качестве основы исп ользу ю т солевой агар. По п роп иси, у казанной наэтикетке, готовят1,8 - 2 % агар, рН 7,2 -
7,4. К расп лавленному и охлаж денному |
до 40 - 50 |
°С агару , соб лю дая |
||||||
п равила асеп тики, |
доб авляю т 20 |
% |
ж елточной |
взвеси (асеп тически |
||||
извлеченной из яйца ж елток взб алтываю т с 200 |
мл изотонического |
|||||||
раствора хлорида натрия). |
Смеш иваю т тщ ательно агар с |
ж елточной |
||||||
взвесью , разливаю т п о 20 |
мл вчаш ки Петри. Средатакж е п озволяет |
|||||||
диф ф еренцировать |
стаф илококки, |
п роду циру ю щ ие лецитиназу , |
от |
|||||
стаф илококков, |
не выделяю щ их этот ф ермент, п о об разованию |
зон |
||||||
п ому тнения |
с |
п ерламу тровым |
|
оттенком |
вокру г |
колоний |
лецитиназоп олож ительных видов(ф ерментрасщ еп ляетлецитин ку риного ж елтка).
|
Диффер енциа л ьно -д иа гно ст ическиеср ед ы |
|
|
|
|||
|
Ср ед а |
Р ессел я. Применяется п ри изу чении б иохимических свойств |
|||||
энтероб актерий (ш игелл, |
сальмонелл). Содерж ит п итательный агар, |
||||||
лактозу , глю козу |
и |
индикатор б ромтимоловый |
синий. |
Ц вет |
|||
п риготовленнои среды травянисто-зеленый. |
|
|
|
||||
|
Ср ед а |
Энд о . |
В ып у скается в виде п орош ка, который состоит из |
||||
высу ш енного п итательного агара, содерж ит 1 % лактозу |
и индикатор - |
||||||
основной |
ф у ксин, |
об есцвеченный |
су льф итом |
натрия. |
Свеж еп риготовленнаясредаб есцветнаилиимеетб ледно-розову ю окраску . При росте лактозоп олож ительных б актерий их колонии окраш иваю тся в
темно-красный цвет с металлическим |
б леском; лактозоотрицательные |
|||
б актерии об разу ю тб есцветныеколонии. |
|
|
||
Ср ед а |
П л о скир ева (ба кт о а га р Ж |
). |
В ып у скается в су хом виде и |
|
содерж итп итательный агар с лактозой, |
б риллиантовым зеленым, солями |
|||
ж елчных кислот, |
минеральными солями и индикатором (нейтральный |
|||
красный). |
Э та |
среда является |
не |
только диф ф еренциально- |
диагностической, |
но и селективной, |
так |
как п одавляет рост многих |
микроорганизмов(киш ечнаяп алочкаи др.) и сп особ ству етлу чш ему росту некоторых п атогенных б актерий (возб у дители б рю ш ноготиф а, п аратиф ов, дизентерий). Л актозоотрицательные б актерии об разу ю т на этой среде б есцветныеколонии, алактозоп олож ительныекрасные.
Висмут -сул ьфит а га р . Среда п редназначена для выделения сальмонеллиз инф ицированного материала. В ып у скается всу хом виде; содерж иттрип тический гидролизаткильки, глю козу , неорганическиесоли, б риллиантовый зеленый, агар. Д иф ф еренциру ю щ ие свойства среды