![](/user_photo/65070_2azrz.gif)
6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Исследование_агрегации_тромбоцитов
.pdf![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d11x1.jpg)
Каскад арахидоновой кислоты
Сильные агонисты (тромбин, коллаген, АДФ и |
арахидоновая кислота в высоких концентрациях, фактор активации тромбоцитов) |
Фосфолипиды мембраны
|
Активность фосфолипазы |
|
Цитоплазма Са2+ |
Р |
|
Е |
|
Ц |
цАМФ |
Е |
|
П |
|
Т |
|
О |
Аденилатциклаза |
Р |
|
Ы |
|
агонисты |
|
Р |
|
Е |
Аденилатциклаза |
Ц |
|
Е |
|
П |
|
Т |
цАМФ |
О |
|
Р |
|
Ы |
|
|
Цитоплазма Са2+ |
|
Активность фосфолипазы |
Фосфолипиды мембраны
Эндотелиальная клетка
Арахидоновая кислота
Эйкозопентаеновая кислота
циклооксигеназа
Эндоперекиси простагландинов G2, H2
простациклинсинтетаза
простациклин
Простациклин
агрегация
Тромбоксан А2
т боксан А
тромбоксансинтетаза
Эндоперекиси простагландинов G2, H2
циклооксигеназа
Эйкозотетраеновая кислота
Арахидоновая кислота
Тромбоцит
Рис.2 Источники и продукты реализации «каскада арахидоновой
кислоты» в эндотелиальной клетке и тромбоците.
Для чего исследуют агрегационную способность тромбоцитов?
Оценка тромбоцитарного гемостаза
Мониторинг антиагрегантной терапии
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d13x1.jpg)
Методы исследования агрегационной способности тромбоцитов
Качественные
Качественный экспрессметод визуальной оценки на предметном стекле по А.С. Шитиковой
Качественный пробирочный метод по
R.M. Biggs
Гемолизат-агрегационный тест по З.С. Баркагану, Б.Ф. Архипову и В. М.
Кучерскому
Количественные
Турбидиметрический оптический метод по Борну и О’Брайену
Флуктуационный метод по З.А Габбасову
Импедансная
агрегатометрия
Люминисцентная
агрегатометрия
«Золотой стандарт»
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d14x1.jpg)
Турбидиметрический метод исследования агрегации тромбоцитов
1000 об/мин, 10 минут Богатая тромбоцитами плазма
3000 об/мин, 10 мин Бедная тромбоцитами плазма
3,8% цитрат натрия Кровь-Цитрат 9:1
200 мкл плазмы (+25 мкл индуктора)
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d15x1.jpg)
Принцип метода
Светопропускание 100%
Бедная тромбоцитами плазма
Регистрируются изменения светопропускания богатой тромбоцитами плазмы после добавления индуктора агрегации
Светопропускание 0%
Богатая тромбоцитами плазма
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d16x1.jpg)
Низкая концентрация индуктора агрегации
1 5 |
|
3 0 |
% |
|
|
, |
|
|
|
|
|
|
|
2 5 |
Светопропускание |
|
|
|
|
1 0 |
3 |
2 0 |
|
|
|
1 5 |
|
5 |
2 |
1 0 |
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
|
|
0 |
|
0 |
1 |
Время, мин |
|
|
|
|
0 – неактивированные тромбоциты
1 – фаза активации
2 – фаза индуцированной агрегации
3 – фаза дезагрегации с последующей стабилизацией
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d17x1.jpg)
Высокая концентрация индуктора агрегации
|
5.0 |
|
3 |
30 |
, % |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
25 |
Светопропускание |
|
|
|
0 |
||
|
.0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
20 |
|
|
.0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
15 |
|
|
.0 |
|
|
|
|
|
|
2 |
|
10 |
|
|
.0 |
|
|
|
|
|
|
|
5 |
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
1 |
|
Время, мин |
|
|
|
|
|
0 – неактивированные тромбоциты
1 – фаза активации
2 – фаза индуцированной агрегации
3 – фаза высвобождения с последующей стабилизацией
Флуктуационный метод
•Основан на анализе флуктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале
•Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему радиусу агрегатов
•Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования
спонтанной агрегации и агрегации под действием низких концентраций индукторов
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d19x1.jpg)
Интерпретация R-кривой (кривой размера агрегатов) Низкая концентрация индуктора агрегации
1 5 |
|
3 0 |
% |
|
|
, |
|
|
|
|
|
|
|
2 5 |
Светопропускание |
|
|
|
|
1 0 |
2 |
2 0 |
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
1 5 |
|
5 |
3 |
1 0 |
|
|
|
5 |
|
0 |
|
0 |
|
0, 1 |
Время, мин |
|
|
0 – неактивированные тромбоциты
1 – фаза активации
2 – фаза индуцированной агрегации, увеличение числа и размера агрегатов
3 – фаза дезагрегации с последующей стабилизацией, уменьшение числа и
размера агрегатов
![](/html/65070/203/html_uenquVs_Bj.Hus8/htmlconvd-dsn89d20x1.jpg)
Интерпретация R-кривой (кривой размера агрегатов) Высокая концентрация индуктора агрегации
5.0 |
|
30 |
, % |
|
|
||
|
3 |
|
|
0 |
25 |
Светопропускание |
|
|
0 |
||
.0 |
|
|
|
|
2 |
20 |
|
.0 |
|
|
|
|
|
15 |
|
.0 |
|
|
|
|
|
10 |
|
.0 |
|
5 |
|
|
|
|
|
0, 1 |
Время, мин |
|
|
|
|
|
0 – неактивированные тромбоциты
1 – фаза активации
2 – фаза индуцированной агрегации, увеличение числа и размера агрегатов
3 – фаза высвобождения с последующей стабилизацией, уменьшение числа и
увеличение размера агрегатов