2 курс / Микробиология 1 кафедра / 5. 1
.pdfМЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ
1.Алгоритм ответа по частной бактериологии:
латинское название возбудителя;
морфо-тинкториальные свойства;
культуральные свойства;
биохимические свойства (если имеют диагностическое значение);
антигенная структура (если имеет диагностическое значение);
факторы патогенности;
источник инфекции, пути заражения;
вызываемые заболевания;
материал для микробиологического исследования;
методы микробиологической диагностики;
специфическая профилактика и специфическое лечение инфекционного заболевания.
2.Характеристика стафилококков, вызываемые заболевания. Микро-
биологическая диагностика стафилококковых инфекций, специфиче-
ская терапия.
Род Staphylococcus включает около 40 видов, из них наибольшее значение в патологии человека имеют S.aureus, S.epidermidis, S.saprophyticus.
Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, непо-
движны, имеют микрокапсулу, спор не образуют, в мазках располагаются скоп-
лениями в виде гроздьев винограда.
Культуральные свойства: факультативные анаэробы, нетребовательны к питательным средам, культивируются на МПА с образованием пигментирован-
ных колоний желтого или белого цвета, в МПБ дают диффузно-мутящий рост.
Для идентификации стафилококков имеет значение характер роста на кровяном агаре (зоны гемолиза), желточно-солевом агаре (ЖСА) – определение лецити-
назы.
3
Чистая культура Staphylococcus aureus. Окраска по Граму.
Факторы патогенности.
1.Факторы адгезии:
-микрокапсула;
-компоненты клеточной стенки: пептидогликан и тейхоевые кислоты (обес-
печивают адгезию на клетках организма);
-S.epidermidis вырабатывает особый вид слизи (полисахарид, гликокаликс),
обеспечивающий их прикрепление к полимерным материалам катетеров,
искусственных клапанов сердца, протезов сосудов и суставов и создание на них бактериальной биопленки. Это приводит к развитию сепсиса и эндокар-
дита, обусловленных «госпитальными штаммами» S.epidermidis.
2.Белок А угнетает фагоцитоз.
3.Перекрестно реагирующие антигены имеют антигенную общность с клетками кожи и почек человека.
4.Ферменты инвазии:
-плазмокоагулаза вызывает свертывание белков сыворотки крови, образуя фибриновую «псевдокапсулу», защищающую стафилококки от фагоцитоза.
Плазмокоагулаза является одним из важных маркеров различных видов стафилококков для их дифференциации. S.aureus имеет плазмокоагулазу и относится к коагулазоположительным стафилококкам, S.epidermidis и S.saprophyticus не имеют плазмокоагулазы и относятся к коагулазоотрица-
тельным (КОС);
4
-гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани,
что способствует распространению стафилококков в организме;
-фибринолизин расщепляет фибрин и способствует распространению ста-
филококков в организме;
-дезоксирибонуклеаза расщепляет ДНК;
5. Экзотоксины:
-гемолизины 4-х типов (мембранотоксины), токсичные для эритроцитов,
лейкоцитов, макрофагов, фибробластов;
-лейкоцидин разрушает лейкоциты;
-эксфолиативный токсин разрушает межклеточные контакты в эпидерми-
се, вызывает синдром «ошпаренной кожи»;
-токсин синдрома токсического шока вызывает системное поражение ор-
ганизма в виде синдрома токсического шока (СТШ) с высокой летально-
стью;
-энтеротоксины вызывают симптоматику острого пищевого отравления.
Все токсины, кроме гемолизинов, продуцирует только S.aureus.
6.R-плазмиды детерминируют устойчивость к нескольким антибиотикам, в
т.ч. за счет продукции β-лактамаз. В клинической практике большое значение имеют метициллинрезистентные S.aureus (MRSA) – штаммы S.aureus, устойчи-
вые к большой группе антибиотиков (β-лактамы). MRSA адаптированы к вы-
живанию в присутствии метициллина, оксациллина. Часто вызывают внутри-
больничные инфекции.
S.aureus распространен повсеместно, входит в состав микробиоты кожи,
носоглотки, ротоглотки, опасен как возбудитель внутрибольничных (госпи-
тальных) инфекций.
Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель. Часто форми-
руется носительство у медперсонала. Носовая полость является основной зоной
колонизации S.aureus.
5
Пути заражения: воздушно-капельный, контактный, алиментарный. У
лиц со сниженной резистентностью возможен эндогенный способ заражения за счет транслокации S.aureus в другие биотопы организма.
Инфекции, вызываемые S.aureus, многообразны, т.к. поражаются любые ткани и органы (табл. 1).
|
Таблица 1 |
Заболевания, вызываемые S.aureus |
|
Формы заболевания |
Материал для исследования |
Гнойные поражения кожи (фурункулы, |
Гнойное отделяемое, гнойное со- |
карбункулы, абсцессы, флегмоны, син- |
держимое |
дром «ошпаренной кожи») |
|
Мастит |
Грудное молоко, гной из абсцесса |
Ангина, тонзиллит |
Мазок из ротоглотки, с миндалин |
Пневмония, бронхопневмония, плевроп- |
Мокрота, промывные воды брон- |
невмония |
хов, кровь |
Артриты |
Суставная жидкость |
Конъюнктивиты |
Гнойное отделяемое конъюнктивы |
Инфекции верхних и нижних мочевых |
Моча |
путей |
|
Пищевые отравления |
Промывные воды желудка, рвот- |
|
ные массы, фекалии, остатки пищи |
Сепсис, эндокардиты |
Кровь |
Менингит |
Кровь, ликвор |
Гематогенный остеомиелит |
Гнойное отделяемое свища, кровь |
Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций.
Бактериологический метод с посевом на соответствующие питательные среды и идентификацией по морфологическим, культуральным, биохимиче-
ским и патогенным свойствам и постановкой антибиотикограммы. Фаготипи-
рование выделенных культур S.aureus производят по эпидемиологическим по-
казаниям при пищевых отравлениях и внутрибольничных инфекциях.
Для лечения используют антимикробные препараты. Для специфического лечения в некоторых случаях возможно применение стафилококкового бак-
териофага, антитоксической противостафилококковой плазмы или имму-
ноглобулина. Для специфической профилактики разработан стафилококко-
вый анатоксин.
6
3. Характеристика стрептококков, вызываемые заболевания. Микробио-
логическая диагностика стрептококковых инфекций.
Род Streptococcus включает 20 видов. Наибольшее значение в патологии человека имеют S.pyogenes, S.agalactiae, S.sanguis, S.mitis, S.mutans, Enterococcus faecalis, S.pneumoniae.
Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные кокки, непо-
движны, спор и капсул (за исключением S.pneumoniae) не образуют, в мазках располагаются цепочками или попарно.
Чистая культура Streptococcus pyogenes. Окраска по Граму.
Культуральные свойства: факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, на кровяном агаре часто образуют колонии с зонами ге-
молиза.
Виды гемолиза:
-гемолиз: вокруг колоний микроорганизмов образуются зоны позелене-
ния («зеленящие стрептококки»);
-гемолиз: полный гемолиз вокруг колоний (прозрачная зона);
-гемолиз: отсутствие видимого гемолиза.
Антигенная структура: стрептококки по полисахаридным антигенам кле-
точной стенки разделены на 20 серогрупп. В патологии человека основная роль принадлежит стрептококкам группы А.
7
Стрептококки входят в состав нормальной микробиоты организма челове-
ка, в частности, кожи, слизистых оболочек и кишечника, но при снижении ре-
зистентности организма могут вызывать заболевания.
Наиболее патогенным и эпидемиологически значимым для человека явля-
ется вид S.pyogenes, обладающий значительным набором факторов патоген-
ности:
1.Фактор адгезии: липотейхоевая кислота клеточной стенки;
2.Белок М подавляет фагоцитоз;
3.Перекрестно реагирующие антигены имеют антигенную общность с тканью сердца и почек.
4.Ферменты инвазии:
-фибринолизин (стрептокиназа) вызывает растворение фибриновых тром-
бов, способствует распространению по кровеносному руслу;
-гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту соединительной ткани,
что способствует распространению стрептококков в организме;
-ДНК-аза разрушает молекулы ДНК.
5.Экзотоксины:
-эритрогенный токсин является суперантигеном, действие которого подоб-
но действию стафилококкового токсина СТШ, вызывает скарлатину и СТШ;
-гемолизины (О- и S-стрептолизины) оказывают гемолитическое и цитоток-
сическое действие на эритроциты, лейкоциты, тромбоциты;
Источники инфекции: больной человек, бактерионоситель, реже живот-
ные (коровы).
Пути заражения: воздушно-капельный, контактный, для S.agalactiae – ин-
транатальный (во время родов).
Заболевания, вызываемые стрептококками, достаточно разнообразны
(табл. 3).
8
|
|
|
|
|
|
Таблица 3 |
|
|
Основные заболевания, вызываемые стрептококками |
|
|||||
Виды стрептококков |
Нозологические формы |
Материал для |
|||||
|
|
заболевания |
исследования |
||||
β-гемолитические: |
|
|
|
|
|
||
Серогруппа А: |
ангина, тонзиллит, фарингит |
мазок |
со |
слизистой |
|||
S.pyogenes |
оболочки ротоглотки |
||||||
|
|
||||||
|
|
поражения кожи (стрепто- |
гнойное отделяемое |
||||
|
|
дермия, флегмона) |
|
|
|
|
|
|
|
рожа |
|
- |
|
|
|
|
|
скарлатина |
|
мазок |
со |
слизистой |
|
|
|
|
оболочки ротоглотки |
||||
|
|
|
|
||||
|
|
ревматизм |
|
сыворотка крови |
|||
|
|
гломерулонефрит |
|
моча, сыворотка крови |
|||
|
|
сепсис, эндокардит |
|
кровь |
|
|
|
Серогруппа В: |
сепсис новорожденных |
кровь |
|
|
|||
S.agalactiae (коммен- |
менингит новорожденных |
кровь, ликвор |
|||||
сал женских половых |
инфекции мочевых путей |
моча |
|
|
|||
путей) |
|
пневмония |
|
мокрота |
|
|
|
-гемолитические: |
|
|
|
|
|
||
S.mitis, |
S.sanguis, |
эндокардит |
|
кровь |
|
|
|
S.mutans |
|
кариес |
|
- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Серогруппа D: |
постхирургические |
гнойно- |
|
|
|
||
E.faecalis |
(комменсал |
воспалительные |
процессы |
гнойное отделяемое |
|||
кишечника) |
кишечника и брюшной по- |
|
|
|
|||
|
|
лости |
|
|
|
|
|
|
|
инфекции мочевых путей |
моча |
|
|
||
|
|
эндокардит |
|
кровь |
|
|
Основной метод диагностики – бактериологический. Иногда используют
серологический метод для определения в сыворотке крови антител против
стрептолизина О и т.д. (при ревматизме).
Специфическая профилактика и лечение стрептококковых инфекций не
разработаны.
9
4. Характеристика пневмококков, вызываемые заболевания. Микробио-
логическая диагностика пневмококковых инфекций.
Пневмококки – Streptococcus pneumoniaе.
Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные диплококки ланцетовидной формы, образуют капсулу в организме, спор и жгутиков не
имеют.
Чистая культура Streptococcus pneumoniaе. Окраска по Граму.
Культуральные свойства: факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам, растут на кровяном агаре, образуют гладкие, мелкие ко-
лонии с зонами -гемолиза.
Антигенная структура: пневмококки дифференцируют по полисахарид-
ным капсульным антигенам и выделяют 90 сероваров.
Факторы патогенности:
1.Капсула защищает от фагоцитоза.
2.Протеаза IgA разрушает секреторные IgA и способствует адгезии пневмококков на слизистых оболочках.
3.Гиалуронидаза и нейраминидаза разрушают основное вещество соеди-
нительной ткани.
4. Гемолизин.
Многие серовары пневмококков являются нормальными обитателями но-
соглотки, но могут вызывать патологию у человека, как при эндогенном, так и при экзогенном путях заражения и ослабленном иммунитете. Наиболее виру-
10
лентны пневмококки I, II и III сероваров. III серовар, имеющий мощную капсу-
лу, является высоко вирулентным и вызывает тяжелые деструктивные пораже-
ния тканей.
Источник инфекции: больной человек, бактерионоситель.
Путь заражения: воздушно-капельный.
Заболевания, вызываемые пневмококками, представлены в табл. 4.
|
Таблица 4 |
Заболевания, вызываемые пневмококками |
|
Нозологические формы |
Материал для исследования |
крупозная пневмония |
мокрота; у детей обязательно кровь |
септицемия, эндокардит |
кровь |
отит |
гнойное отделяемое из уха |
менингит |
ликвор |
конъюнктивит |
отделяемое конъюнктивы |
Метод диагностики – бактериологический.
Специфическая профилактика: химическая (полисахаридная) вакцина
на основе капсульных антигенов.
5. Возбудители сепсиса. Микробиологическая диагностика.
Сепсис (от греч. sepsis – гниение) – системная воспалительная реакция в ответ на генерализацию местного инфекционного процесса с развитием бакте-
риемии и токсемии. Сопровождается размножением возбудителя в крови и ха-
рактерной клинической и патологоанатомической картиной.
Особенность сепсиса заключается в многообразии его возбудителей при достаточно общей клинической картине заболевания (табл. 5).
|
Таблица 5 |
Наиболее значимые возбудители сепсиса |
|
Аэробы: |
Анаэробы: |
стафилококки, стрептококки, пневмококки, эн- |
пептококки, пептострепто- |
терококки, энтеробактерии (кишечные палоч- |
кокки, вейлонеллы, бакте- |
ки, клебсиеллы, протеи и др.), синегнойная па- |
роиды, эубактерии, фузо- |
лочка, дрожжеподобные грибы рода Candida |
бактерии |
11
Правила забора крови при подозрении на сепсис:
1.Кровь забирают в процедурном кабинете, соблюдая правила асептики и антисептики;
2.Лучше забирать кровь до назначения антибактериальной терапии, если антибиотики назначены, то перед очередным введением антибиотика;
3.Натощак или через 3 часа после еды;
4.Во время подъема температуры;
5.Количество крови: у взрослых 10 мл, 2 пробы из двух сосудов или двух участков одного сосуда (локтевой вены), у детей (в зависимости от возраста) –
1,5-5 мл. Кровь помещают во флаконы со специальной транспортной средой; 6. Кровь из подключичного катетера необходимо забирать только при по-
дозрении на катетер-ассоциированную инфекцию.
Диагностика сепсиса проводится бактериологическим методом с посе-
вом крови на специальные питательные среды в аэробных и анаэробных усло-
виях культивирования. Посев крови необходимо проводить несколько раз.
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА
1.Световая микроскопия препаратов из чистых культур стафилококков, стрептококков и пневмококков, окрашенных по Граму.
2.Световая микроскопия нативных препаратов из крови больного сепсисом, окрашенных по Граму.
3.Схема бактериологического исследования крови больного с подозрением на аэробный сепсис.
I этап исследования.
Посев крови больного во флаконы со специальной средой для аэробного и анаэробного культивирования в соотношении 1:10; приготовление мазка крови, окрашивание по Граму, световая микроскопия.
Посевы инкубируют при 370С в течение 8-10 дней, ежедневно просматривая их.
II этап исследования (через 24-48 часов).
1)Изучение характера роста в жидкой питательной среде:
2)Приготовление мазков из жидкой питательной среды, окрашивание по Граму, микроскопия:
3)Высев на плотные питательные среды с целью получения чистой куль-
туры и определения антибиотикочувствительности. Посевы инкубируют при 370С 24-48 часов.
12