- •ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ И МЕТОДЫ ДЕТЕКЦИИ ПЦР- ПРОДУКТОВ
- ••ПЦР – полимеразная цепная реакция — ферментативная реакция, осуществляемая in vitro с помощью
- •Полимеразная цепная реакция
- •Стадии проведения ПЦР - анализа
- •1 стадия
- •2 стадия Состав реакционной смеси
- •пригоден минимально обработанный исходный биологический материал, даже частично разрушенный (цельная кровь, пятна высохшей
- •Роль праймеров в реакционной смеси ПЦР
- •Амплификатор
- •Цикл ПЦР
- ••с каждым циклом ПЦР количество ампликонов увеличивается экспоненциально (приближается к зависимости 2n, где
- •3стадия
- •5’ праймер
- •http://www.ld.ru/PCR/ilist-4314.html
- •Детекция ампликонов в агарозном геле
- •ГЕЛЬ - ЭЛЕКТРОФОРЕЗ
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ И МЕТОДЫ ДЕТЕКЦИИ ПЦР- ПРОДУКТОВ
Выполнил студент Группы ОС-208 Мельник Илья
•ПЦР – полимеразная цепная реакция — ферментативная реакция, осуществляемая in vitro с помощью термостабильной ДНК- полимеразы на матрице ДНК с использованием олигонуклеотидных ДНК-затравок (праймеров), комплементарных нуклеотидным последовательностям противоположных цепей ДНК на границах амплифицируемого участка
•Амплификация – увеличение числа копий ДНК
•Ампликоны – продукты ПЦР, синтезируемые в процессе амплификации копии ДНК-мишени
•Отжиг – присоединение праймеров к одноцепочечной ДНК-мишени
Полимеразная цепная реакция
ПЦР, polymerase chain reaction - PCR
1983 г. Кэри Мюллис (1993 г. – Нобелевская премия по химии)
в основе – принципы и механизмы естественной репликации ДНК
позволяет амплифицировать (многократно увеличить количество копий, клонировать) in vitro фрагмент ДНК с известной последовательностью нуклеотидов
Стадии проведения ПЦР - анализа
1. Выделение (экстракция) ДНК или РНК из исследуемого образца
2.Амплификация специфического фрагмента ДНК
3.Детекция продуктов амплификации
1 стадия
2 стадия Состав реакционной смеси
•ДНК(матрица) выделенная из исследуемого материала
•Смесь дезоксинуклеозидтрифосфат
•ДНК-полимераза (Taq-полимераза)
•Праймеры
пригоден минимально обработанный исходный биологический материал, даже частично разрушенный (цельная кровь, пятна высохшей крови, смывы из ротовой полости, старые срезы тканей и т.д.)
Роль праймеров в реакционной смеси ПЦР
• Праймер – искусственно синтезированный олигонуклеотид (последовательность из небольшого количества нуклеотидов ),представляющий собой одноцепочечную ДНК длиной 18- 30 оснований.
•Является затравкой, с которой ДНК-полимераза начинает синтез комплементарной цепи.