Лаба 4
.docx
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования
«МИРЭА – Российский технологический университет»
РТУ МИРЭА
|
Институт тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова |
|
(наименование Института)
|
Кафедра биотехнологии и промышленной фармации |
|
(наименование кафедры)
Лабораторная работа №4
«Анализ анионов методом капиллярного электрофореза»
Работу выполнила
Студентка группы ХББО-02-16
Иванова Елена Анатольевна
Руководитель работы
Тюкова Виктория Сергеевна
Москва, 2019
Оглавление
Вывод 5
Цель работы: изучить теоретические основы метода капиллярного электрофореза, его преимущества и недостатки по сравнению с другими методами анализа; освоить систему фармацевтического анализа PA 800 Plus; получить в ходе работы электрофореграмму и определить по ней время миграции для различных анионов органических кислот.
Реактивы, оборудование и их характеристика:
Лабораторная работа проводится с использованием набора для анализа анионов The SCIEX Anion Analysis Kit, который содержит все необходимые материалы, для разделения и количественного определения анионов в системе фармацевтического анализа PA 800 Plus.Раствор для покрытия капилляра
• Буфер для разделения
• Раствор для кондиционирования Na
• Раствор для промывки капилляра
• Раствор для промывки* (килота)
• Внутренний стандарт (I.S.)
• Смесь для анализа органических кислот
Посуда, необходимая для выполнения анализа:
• Универсальные виалы, вместимостью 2 мл
• Крышки для универсальных виал
• Микровиалы
• Виалы для ПЦР
• Крышки для ПЦР виал
• Держатель для ПЦР виал
• Автоматическая пипетка
• Наконечники для автоматической пипетки
Ход работы
Работу начали с заполнения универсальных виал водой (В), раствором для промывки капилляра (П), раствором для покрытия капилляра (Пк), буфером для разделения (Р) и раствором для кондиционирования Na (Na). При заполнении руководствовались основными правилами:
• Используемые крышки для виал должны быть чистыми и совершенно сухими.
• Никогда не используйте крышки от виал повторно.
• Не переполняйте виалы, не залевайте в виалу более 1,7 мл жидкости. Иногда переполнение виал вызывает появление гидростатического давления, выталкивающего жидкость в напорную линию, что может привести к повреждению системы нагнетания давления.
• Не допускайте недозаполнения виал или слишком низкого падения уровня жидкости. Низкий уровень жидкости в разделительных виалах может привести к плохому разделению.
Потому все виалы заполнили 1,5 мл необходимого раствора, кроме виалы, предназначенную для отходов (О), поместив в нее 0,6 мл раствора для промывки капилляра.
Заполненный виалы расположили в штативы как показано на рис. 1
Рис. 1. Расположение универсальных виал в штативах для буферов:
П – раствор для промывки капилляра, Пк – раствор для покрытия капилляра, Р – буфер для разделения, Na – раствор для кондиционирования Na, О – отходы, В – вода.
Также каждая подгруппа взяла по 1 образцу для исследования (4 органических кислоты: щавелевая, яблочная, кофеиновая, аминокапроновая и 1 тестовая смесь), заполнила виалы 200 мкл пробы и разместила виалы во входном штативе в положениях А3-Е3.
Далее при помощи преподавателя запустили последовательные методы:
Кондиционирование капилляра
Разделение аналитов
Выключение
В результате были получены электрофореграммы. На рис. 2 представлена электрофореграмма для раствора щавелевой кислоты. Результат анализа электрофореграммы
Время миграции оксолат-иона 3.769 мин (при значении тока 43.7-45 мкА)
Рис. 2. Электрофореграмма раствора щавелевой кислоты
Вывод
В ходе работы освоена система фармацевтического анализа PA 800 Plus; получена электрофореграмма щавелевой кислоты и определено по ней время миграции, равное 3.769 мин.